[发明专利]利用超高效液相色谱-质谱联用检测白芍饮片中黄曲霉毒素G2;G1;B2;B1的方法

权利要求书

1.一种利用超高效液相色谱-质谱联用技术检测白芍中黄曲霉毒素G2,G1,B2,B1的方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1)供试品溶液的制备：取白芍饮片粉碎后的粉末适量，经提取、免疫亲合柱洗脱纯化、稀释并定容，得供试品溶液；以粉末质量计，所述供试品溶液浓度为0.01～1g/ml；

混合对照品储备溶液的制备：分别取黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1四种对照品适量，配置成含有黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的混合照品储备溶液；所述混合对照品储备溶液中，黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的浓度分别独立的为0.01～10μg/mL；

基质标准曲线溶液的制备：取适量白芍饮片粉碎后的粉末至少五份，按一定梯度分别加入不同体积的混合对照品储备溶液，然后按照所述供试品溶液的制备相同的方法，配制得到具有一定浓度梯度的至少五个基质标准曲线溶液；

(2)上机分析，按以下色谱条件和质谱条件进行检测；

色谱条件为：色谱柱为Poroshell 120EC C18 1.9μm 2.1×100mm；流动相包括流动相A和流动相B；流动相A为体积比1:(0.9～1.1)的乙腈-甲醇的混合溶液；流动相B为0.005～0.02moL/L乙酸铵水溶液；采用梯度洗脱：流动相A+流动相B＝100％；0-4.0min，流动相A保持体积百分比为40％；4.0-4.1min，流动相A体积百分比由40％递增至90％；4.1-7.0min，流动相A保持体积百分比为90％；

质谱条件：采用质谱检测器，ESI离子源，正离子模式，进行多反应监测，选择黄曲霉毒素G2：m/z331.1--313.1；黄曲霉毒素G1：m/z329.1--243.1；黄曲霉毒素B2：m/z315.1--259.1；黄曲霉毒素B1：m/z313.1--241.1作为检测离子对；

(3)数据分析

将所述至少五个基质标准曲线溶液以及供试品溶液按所述色谱条件和质谱条件依次进样，记录图谱数据；根据至少五个基质标准曲线溶液的峰响应强度数据和浓度数据分别绘制出黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的基质标准曲线；根据基质标准曲线分别代入供试品溶液的峰响应强度数据分别计算并得出供试品溶液中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的浓度。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱条件中，流速为0.2～0.4mL/min；柱温为35～45℃；进样量为0.1～5μL。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，色谱条件为：流速为0.3mL/min；柱温为40℃；进样量为2μL。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，流动相A为体积比1:1的乙腈-甲醇的混合溶液；流动相B为0.01moL/L乙酸铵水溶液。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，供试品溶液的制备：取白芍饮片粉碎后的粉末适量，按粉末质量计，将粉末与0.5～1.5倍质量的氯化钠、10～20倍体积的70％甲醇溶液混合；搅拌，离心，取2～4倍体积的上清液，用水稀释至6～12倍体积，然后用微孔滤膜过滤；取3～5倍体积滤液采用免疫亲合柱依次用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，用甲醇定容，得供试品溶液。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，混合对照品储备溶液的制备：分别取黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1四种对照品适量，混合，或取黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1混合对照品适量，用甲醇稀释，定容，得混合对照品储备溶液。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，基质标准曲线溶液的制备：按照供试品溶液的制备相同的步骤配制至少五份溶液，但所述至少五份溶液的配制过程中，在将粉末与氯化钠、70％甲醇溶液混合时，分别添加呈一定梯度的不同体积的混合对照品储备溶液进行混合，得到含黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1四种对照品均呈一定浓度梯度的至少五份基质标准曲线溶液。