[发明专利]一种茶树精油抗菌机制的研究方法

权利要求书

1.一种茶树精油抗菌机制的研究方法，具体的步骤为：

扫描电镜观察菌体细胞膜的变化，具体将茶树精油置于菌液中，使其浓度为0.5 mg/mL，然后置于37 ℃振荡培养4 h后，8000 rpm离心10 min，加入2.5%戊二醛固定3-4 h，菌体用50%、70%、80%、90%、100%乙醇溶液梯度脱水各处理15 min，最后用乙酸异戊酯置换30min，干燥喷金后扫描。

2.茶树精油处理对菌胞内大分子物质的影响，将培养至对数期的菌液高速离心10min，清洗3次并重悬，分别向内添加茶树精油，使其浓度分别为1/4MIC、1/2MIC、MIC、2MIC，在37 ℃振荡培养4 h，高速离心后收集上清液，利用紫外光分光光度计测定260 nm处上清液的吸光度。

3.倒置荧光显微镜观察细菌核酸的变化，具体将培养至对数期的菌液高速离心10 min并重悬，向菌液中添加茶树精油使其浓度为0.5 mg/mL，37 ℃振荡培养4 h，载玻片上滴加等体积的DAPI染色液和菌悬液样品进行暗反应10 min，使用倒置荧光显微镜观察。

4.将菌液高速离心10 min，清洗3次后加入等量磷酸盐缓冲液重悬，向菌液中添加茶树精油使其浓度为0.5 mg/mL，不添加精油的实验组作空白对照，于37 ℃振荡培养4 h，清洗3次并再次重悬，利用细菌基因组DNA提取试剂盒分别提取实验组和对照组菌体的DNA，紫外分光光度计测定260 nm处吸光度。

5.将菌液高速离心10 min，清洗3次后加入等量磷酸盐缓冲液重悬，向菌液中添加茶树精油使其浓度为0.5 mg/mL，不添加精油的实验组作空白对照，于37 ℃振荡培养0.5 h，清洗3次并再次重悬，利用蛋白质检测试剂盒分别测定实验组和对照组细菌的蛋白质含量。