[发明专利]一种彗星实验中的换液方法

说明书

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其是一种彗星实验中的换液方法，包括以下步骤：S1、第一层胶的制备，将做好标记的载玻片放在50℃的干浴锅上1‑3分钟后，取煮沸后冷却的试剂M 200ul滴在同样预热的载玻片的磨砂面，迅速盖上干净的盖玻片，制成滴片；S2、之后再制备第二层胶，从4℃环境中拿出滴片，轻揭去盖玻片，形成胶板，放在37℃干浴锅上1‑3分钟后，将已经消化后得到的细胞悬液与37℃中的试剂N混合，均匀滴加胶板上，迅速盖上干净的盖玻片，将准备好的滴片放在4℃的环境中；S3、移除盖玻片，滴片放在试剂盒中，用PWM芯片调节泵进不同的液体。本发明具有操作便捷、使用方便、减少劳动强度，提高工作效率，事半功倍的特点。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及一种彗星实验中的换液方法。

背景技术

彗星实验是分子生物学技术中最为广泛应用的技术。彗星实验首先是对采集的细胞标本进行胶板的制备，将细胞标本通过琼脂糖固定在载玻片上。胶板制备是彗星实验过程中的一个甚为关键的环节。胶板制备不仅直接影响片子的质量，而且对后续在显微镜下阅片也有影响。胶板中的细胞个数太密或者太稀疏，对在显微镜下观察和拍图都有所影响。但是在胶板制作过程中，0.6％低熔点琼脂糖很容易就凝固了，操作难度非常大，需要大量的细胞标本。

同时彗星实验过程中，从A试剂盒中将载玻片取出来放到B试剂盒中的步骤比较多。由于胶板上的胶比较容易滑动，在操作过程中难度系数比较大。在取出载玻片的过程中，载玻片上面的胶很容易脱落，直接影响实验结果，胶一旦脱落，实验就得重新做，给实验操作带来很大的困难。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在操作难度大的缺点，而提出的一种彗星实验中的换液方法。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

设计一种彗星实验中的换液方法，包括以下步骤：

S1、第一层胶的制备，将做好标记的载玻片放在50℃的干浴锅上1-3分钟后，取煮沸后冷却的试剂M 200ul滴在同样预热的载玻片的磨砂面，迅速盖上干净的盖玻片，制成滴片，将准备好的滴片放在4℃的环境中，放置至少30min使其凝固；

S2、之后再制备第二层胶，从4℃环境中拿出滴片，轻揭去盖玻片，形成胶板，放在37℃干浴锅上1-3分钟后，将已经消化后得到的细胞悬液与37℃中的试剂N混合，均匀滴加胶板上，迅速盖上干净的盖玻片，将准备好的滴片放在4℃的环境中，放置至少30min使其凝固；

S3、移除盖玻片，将载玻片放在试剂盒中，并对载玻片进行固定，用PWM芯片调节泵进不同的液体，从而实现换液这一步操作，通过旋转PWM调节芯片调节泵的开关，从而实现液体的上样流速。

优选的，PWM调节芯片调节泵包括PWM调节芯片和浇花泵以及连接管。

优选的，在没有引入PWM调节芯片调节泵时，试剂N在操作中20s就凝固了，在引入PWM调节芯片调节泵时，试剂N在37℃上面1min后胶还没未凝固。

优选的，第一层胶的覆盖面大于第二层胶的覆盖面。

优选的，试剂M由琼脂与无Ca2+、Mg2+的磷酸缓冲液PBS组成，试剂M配置方法包括以下步骤：

A1、称量0.8g琼脂糖溶于100ml的无Ca2+、Mg2+的磷酸缓冲液PBS中，微波炉加热煮沸；

A2、将煮沸的试剂放在室温冷却待用。

优选的，试剂N由琼脂与无Ca2+、Mg2+的磷酸缓冲液PBS组成,试剂N配置方法包括以下步骤：

B1、称量0.6g琼脂糖溶于100ml的无Ca2+、Mg2+的磷酸缓冲液PBS中，微波炉加热煮沸；

B2、将煮沸的试剂放在37℃水浴锅中待用。