[发明专利]一种通过电化学双酶传感器检测毛油中PC含量的方法

说明书

本发明提供一种通过电化学双酶传感器检测毛油中PC含量的方法。通过将胆碱氧化酶和辣根过氧化物酶固定在以MWCNTs/SnO₂/CS作为修饰材料的玻碳电极(GCE)上来制作双酶GCE。在ChOx的添加量为2.5U、HRP的添加量为2.5U和pH为7.5的条件下，双酶GCE对卵磷脂(PC)具有明显的电化学响应，PC含量在10～300mg/L范围内与峰电流呈线性关系，双酶GCE的重现性RSD低于1％，保存45d后的双酶GCE电流值仍为初始电流的93％，制备的双酶GCE具有更好的重现性和稳定性，以期为快速检测毛油中PC的含量提供理论基础。

技术领域

本发明涉及一种电化学快速检测领域，具体涉及一种通过电化学双酶传感器快速检测毛油中PC含量的方法，即利用自制的电化学改性的双酶玻碳电极传感器对毛油中的PC进行高效快速的检测。

背景技术

毛油是植物油中磷脂的含量最高的，而PC更是主要组成部分。油脂精炼加工过程中，如果脱胶不充分，达不到磷脂残留的最低标准，会对剩余精炼工序会产生巨大影响，进而影响油脂的保质期并带来一系列安全性问题。因此，检测毛油中磷脂的含量尤为重要。

目前，磷脂的传统检测方法包括紫外可见光谱法、傅里叶变换近红外光谱法、高效液相色谱法、薄层色谱法、核磁共振波谱法等。但这些检测方法存在操作复杂、检测时间长、成本高等缺点，因此检测毛油中的磷脂应先从单一的PC入手，并逐步应用到含有多组分的毛油中。生物传感器基于酶抑制，是检测许多有毒化合物的可靠工具，食品中得到了广泛应用。能够弥补等传统方法检测费用高、速度慢等缺点，因而广泛用于食品卫生安全性的检测。电化学方法具有良好的再现性、操作稳定性和储存稳定性，灵敏度好及检测速度快、成本低等优点。在脂类快速检测方面取得了广泛应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种通过将ChOx和HRP固定在以MWCNTs/SnO2/CS作为电极修饰材料的GCE上，制备双酶GCE传感器，利用该传感器可以对毛油中的PC进行高效快速的检测，以期为快速检测毛油中PC的含量提供理论基础。

具体实施方式：

具体实施方式一：

用自制的电化学双酶传感器检测毛油中PC含量的方法通过以下步骤实现：步骤一：自制的电化学双酶传感器。取0.15g壳聚糖(CS)粉末置于250mL的烧瓶中，加入浓度为0.3％的CS/乙酸透明溶液，用电动搅拌器搅拌30min，促使CS的充分溶解。2.5mg二氧化锡(SnO2)和5mg多壁碳纳米管(MWCNTs)粉的混合物，加入到5mL的CS/乙酸透明溶液中，超声处理60min，得到MWCNTs-SnO2-CS纳米复合物，于4℃贮存备用；步骤二：制备含有100mg·L-1PC的PBS缓冲溶液为测试底液。将2.5U辣根过氧化物酶溶液滴涂到GCE表面，置于4℃下静置干燥，待表面成薄膜状时滴加5μL戊二醛于电极表面，37℃下交联30min，然后用PBS缓冲液清洗电极表面。GCE上滴加10μL胆碱氧化酶，待表面成薄膜状时滴加5μL戊二醛于电极表面，37℃下交联30min，然后利用PBS缓冲液清洗电极的表面，N2吹干后得到双酶GCE，将其储存在4℃干燥的环境下备用；步骤三：在测试底液中，PC经PLD处理一段时间后获得胆碱，胆碱在ChOx催化作用下生成H₂O₂，H₂O₂再被固定的HRP还原，进而氧化态的HRP与溶液中电子媒介体硫堇之间发生电子转移，最终TH+在电极表面得到电子被还原，从而产生了还原电流，说明了双酶GCE对PC具有明显的电化学响应效果。

具体实施方式二：

本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤一中加入浓度为1％的CS/乙酸透明溶液，其它步骤与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：

本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤二中交联温度为25℃，其它步骤与具体实施方式一相同。