[发明专利]一种检测石斑鱼虹彩病毒的胶体金试纸条及其制备和检测方法

说明书

本发明涉及病毒检测技术领域，公开了一种检测石斑鱼虹彩病毒的胶体金试纸条及其制备方法，所述胶体金试纸条包括底板以及依次搭接固定于底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜以及吸收垫，所述结合垫上包被有金标探针，所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，所述检测线固定有捕获探针，所述质控线固定有质控探针；本发明同时公开了一种采用上述胶体金试纸条检测石斑鱼虹彩病毒的方法。本发明的胶体金试纸条基于核酸适配体结合侧流生物传感器以及胶体金显色的原理制成，具有较高的特异性和灵敏度，组装简单，便于携带，检测方法操作简便，可以对石斑鱼虹彩病毒进行高效、准确、快速的现场实时检测。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，更具体的，涉及一种检测石斑鱼 虹彩病毒的胶体金试纸条及其制备和检测方法。

背景技术

近年来，在石斑鱼等海水养殖动物中暴发和流行的虹彩病毒严重 地威胁着水产养殖业的发展。虹彩病毒在全球范围内已发现和鉴定出 60多种，基于虹彩病毒的宿主范围和全基因组测序信息，虹彩病毒 被划分为五个属，分别为虹彩病毒属、蛙虹彩病毒属、绿虹彩病毒属、 肿大细胞病毒属和淋巴囊肿病毒属。

2003年，科研人员等从养殖的患病石斑鱼体中分离出了一种虹 彩病毒，其具有高致病性，对石斑鱼具有90％以上的致死率，显微镜 下发现该病毒粒子的结构是正二十面体，大部分聚集在宿主胞质中。 其粒子中心为一类核体，周围包被外壳，进而被囊膜包裹，大小在 200nm左右。对该种虹彩病毒进行分析后发现其与蛙虹彩病毒属的一 个成员具有较近的亲缘关系，被认定为蛙虹彩病毒属的一个新种，以 新加坡石斑鱼虹彩病毒(SGIV)命名。SGIV的频繁爆发给水产养殖业 带来了巨大的经济损失，但是目前仍无有效的方法来治疗SGIV感染， 因此，建立有效的诊断方法来早期检测和预防这种病毒性疾病是非常 必要的，然而传统的SGIV检测方法如聚合酶链式反应法或电镜观察 法耗时且需利用专业的仪器设备，所以也很难满足实时检测的要求。

综上所述，研发一种检测石斑鱼虹彩病毒的胶体金试纸条及其制 备和检测方法实为必要。

发明内容

本发明提供的一种检测石斑鱼虹彩病毒的胶体金试纸条及其制 备和检测方法，解决了现有的石斑鱼虹彩病毒检测方法费时费力，检 测条件要求高以及检测程序复杂，不能在现场进行实时检测的问题。 本发明的胶体金试纸条及检测方法基于核酸适配体结合侧流生物传 感器以及胶体金显色的原理，具有较高的灵敏度和特异性，制备组装 简单，便于携带，检测方法简单，操作方便，可以对石斑鱼虹彩病毒 进行高效、准确、快速的检测。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种检测石斑鱼虹彩病毒的胶体金试纸条，所述胶体金试纸条包 括底板以及依次搭接固定于底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜 以及吸收垫，所述结合垫上包被有金标探针，所述金标探针为5’端 巯基修饰的核酸适配体，其核苷酸序列为：5’-SH-TATGTCCATGGC CGCATATT(序列1)；

所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，所述检测线固定有 捕获探针，所述质控线固定有质控探针：

所述捕获探针的核苷酸序列为：TTTGGACTATGTGGAAGTT(序 列2)；

所述质控探针的核苷酸序列为：AATATGCGGCCATGGACATA (序列3)。

本发明还公开了所述检测石斑鱼虹彩病毒的胶体金试纸条的制 备方法，包括以下步骤：

S1.制备样品垫；

S2.制备结合垫，并在结合垫上包被金标探针；

S3.硝酸纤维素膜的处理：采用三维划膜喷金仪将捕获探针和质 控探针以0.5-0.8μL/cm的喷样量在硝酸纤维素膜上划线得到检测线 和质控线，所述检测线和质控线之间的距离为5～6mm；