[发明专利]人可溶性CD80融合基因转化乳酸菌及其应用

说明书

本发明公开了人可溶性CD80(hsCD80)融合基因转化乳酸菌，包括hsCD80基因或CTB‑hsCD80融合基因转化乳酸菌，是将所述hsCD80基因或CTB‑hsCD80融合基因插入到乳酸菌表达载体pLN并转化乳酸菌获得，还公开了该转化菌在制备具有肿瘤免疫治疗效果的口服活菌药物中的应用。本发明中hsCD80和CTB‑hsCD80融合基因转化乳酸菌可制备成活菌悬液、乳制品、活菌菌粉、菌片或胶囊等活菌制剂，作为免疫治疗活菌药物口服后能在人体肠道内增殖和定植，应用于肿瘤、病毒感染或细胞内细菌感染、原发性和继发性免疫低下等疾病的预防与治疗。

技术领域

本发明属于人可溶性CD80(简称hsCD80)基因技术领域，具体涉及人可溶性CD80融合基因转化乳酸菌及其应用。

背景技术

近年来，以免疫检查点(checkpoint)分子为靶点的免疫治疗是目前抗肿瘤研究的热点，多种免疫检查点抑制剂药物，如PD-1、PD-L1人源化抗体已经获准在临床应用，并获得了较好的疗效。

恶性肿瘤之所以能逃避免疫监视，主要原因是恶性肿瘤细胞自身和免疫细胞都会表达一些免疫共抑制分子(co-inhibitory molecular)，又称为免疫检查点(checkpoint)分子，产生免疫抑制，逃避机体的免疫监视。这也是肿瘤治疗需要突破的主要障碍。B7-H1(CD274)和B7-DC(CD273)是两个重要的免疫抑制分子，二者都是CD80(B7.1)的同源分子，都能与T细胞上的受体程序性死亡因子1(programmed death 1，PD-1)结合，抑制产生抗肿瘤免疫，抑制效应T细胞(Te)对肿瘤的杀伤作用。因而，二者又分别被称为PD-1配体1(PD-L1)和配体2(PD-L2)。PD-L1广泛表达于各种恶性肿瘤细胞，受干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等细胞因子的上调。PD-L2则主要表达于DC、巨噬细胞、肥大细胞等。PD-L1和PD-L2都能与T细胞上的受体PD-1或者CD80结合。一方面抑制T细胞的活化，诱导T细胞凋亡；另一方面抑制Te细胞对肿瘤细胞产生的细胞毒作用。近年来，针对PD-1及其配体PD-L1、PD-L2，以及CTLA-4等免疫抑制分子的靶向治疗已经成为抗肿瘤治疗研究的热点。PD-1、PD-L1、PD-L2和CTLA-4的人源化抗体或抑制剂在乳腺癌、结肠癌和肺癌等恶性肿瘤的临床治疗试验中获得了可喜疗效，PD-1人源抗体nivolumab和pembrolizumab，PD-L1抗体atezolizumab已获得日本、美国和澳大利亚等国FDA批准，应用于恶性肿瘤治疗。

除PD-1外，免疫细胞活化后还表达许多检查点分子，如细胞毒T细胞抗原4(CTLA-4)、TIM3、LAG-3等。这些检查点分子通过负反馈调节机制防止免疫反应过程中发生过度免疫和自身免疫。CTLA-4是CD80的负调节受体，主要存在于活化的T细胞、调节性T细胞(Treg)和记忆T细胞(Tm)细胞。CD80与CTLA-4结合抑制辅助T细胞(Th)、Tm细胞活化，刺激Treg细胞增殖，诱导产生免疫耐受。CTLA-4抗体ipilimumab是最早获准上市的检查点抗体药物，主要用于转移性黑色素瘤治疗。TIM3和LAG-3主要表达于活化的CD4⁺和CD8⁺ T细胞，抑制Th1的活化和Te的杀伤作用。TIM3和LAG-3的抑制剂或抗体同样可以提高Te对肿瘤细胞的杀伤作用。

但是，免疫检查点抑制剂在临床上的适用范围较小。只有不到三分之一的肿瘤患者用PD-1抗体治疗后疗效确切，大多数肿瘤患者用药后疗效不佳或无效。这是因为检查点抑制剂主要通过阻断免疫抑制通路起作用，提高机体已经活化的免疫细胞的抗肿瘤作用，而在激发抗肿瘤主动免疫方面的功效较低。比如，PD-1抗体只能提高Te对肿瘤细胞的免疫效应，PD-L1抗体只对PD-L1阳性肿瘤有较好的疗效。但是，免疫细胞和恶性肿瘤通常表达多种不同的免疫抑制分子，不同个体免疫抑制分子表达水平差异较大，也不是所有患者能够自身产生较多的抗肿瘤Te细胞。因此，要提高免疫治疗药物的抗肿瘤疗效，必须首先激发机体的抗肿瘤主动免疫，或激发主动免疫药物与检查点抑制剂联合用药，才能获得较好的疗效。