[发明专利]含人白蛋白的制剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种制备含人白蛋白的制剂的方法，包括：通过控制所述制剂中的长链脂肪酸的含量以及添加泊洛沙姆来提高所述制剂中的人白蛋白的稳定性。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种含人白蛋白的制剂及其制备方法。在本申请中，术语“人白蛋白”包括人血清白蛋白(Human Serum Albumin)、重组人白蛋白(Recombinant Human Albumin)。重组人白蛋白也称为重组人血清白蛋白(RecombinantHuman Serum Albumin)，或者是重组人白蛋白突变体(Recombinant Human AlbuminMutant)。

背景技术

人白蛋白主要的药理作用，包括调节组织与血管间水分的动态平衡，维持正常与恒定的血浆容量，同时还对某些离子和化合物有较高亲和力，与这些物质可逆结合，发挥转运功能。人白蛋白还为肌体提供了大量的氨基酸储备。由于人白蛋白的上述作用，使其可以应用于临床各学科，发挥多种治疗作用。人白蛋白临床主要用于调节血浆胶体渗透压、扩充血容量，治疗创伤性、出血性休克，严重烧伤及低蛋白血症，在中风，肝硬化肝腹水和肾病等常见疾病中都有着广泛的应用。除了直接在临床治疗领域，白蛋白还在疫苗生产所使用的培养基、药品辅料、诊断试剂、新型肿瘤长效制剂产品、化妆品、实验室生物试剂等多个方面，都已经得到了极其广泛的应用。

人白蛋白的结构是一个心型结构的单链非糖基化蛋白，有585个氨基酸，17对二硫键，一个自由巯基，分子量为66438道尔顿。人白蛋白在人体中的半衰期为19～21天。人白蛋白的心形结构由三个主要结构域和六个被17个二硫键包裹的亚结构域组成，它们通过范德华力松散地结合在一起。从其晶体结构可以看出，二硫化物桥赋予螺旋状的球状结构刚度，但提供足够的灵活性，使蛋白质能够根据周围介质的变化进行构象变化。

人白蛋白常规的生产方法是从人血清中分离纯化提取纯化出来，统称为人血清白蛋白。人血清白蛋白的发现和使用已历经几十年，发展成熟为一套完整的生产和制剂工艺(Cohn法-超滤-/或纯化-巴氏灭活-制剂(辛酸钠和/或N-乙酰色氨酸))，其制剂处方已经成为全球各国药典的通用标准。人血清来源的白蛋白稳定性良好，药典中要求其制剂成品置57℃±0.5℃水浴中保温50小时，除颜色有轻微变化外，应无肉眼可见的其他变化。血清来源的白蛋白制剂全部成品应置20-25℃至少4周或30-32℃至少14天，出现浑浊或烟雾状沉淀之瓶进行相关的检查。即使对人血清白蛋白进行如此严格的热稳定检查，临床中依然出现与微小团聚体(aggregation)和原纤维化(fibrillation)聚集体蛋白相关的静脉炎。临床研究证明采用15微米孔径的普通输液器进行静脉输注人血清白蛋白，患者静脉炎的发生率为20％；而采用5微米孔径的精密输液器进行输注人血清白蛋白，患者静脉炎的发生率仅为2.5％。由此证明，人血清白蛋白生产工艺中采用了0.1微米～0.22微米的除菌和除颗粒的过程后，制剂在运输和存放中依然出现新的微小团聚体和微小原纤维化蛋白，导致患者出现较大比例的白蛋白输注静脉炎(薛小萍等临床护理杂志2010年10月第9卷第5期第69～70页)。因此，在一些人血清白蛋白的生产厂家的说明书中明确了使用精密输液器的要求。即使如此，上述的部分不稳定白蛋白的粒径在30nm-100nm之间，一般的除菌滤膜(0.1微米～0.22微米)不能有效除去。该直径的聚集体介于多聚体和可见异物之间，是产生免疫原性等不良反应的主要原因。

人白蛋白的另外一个来源是通过基因重组的方法，培养能够特异性表达人白蛋白的宿主，比如真菌类真核单细胞的毕赤酵母或酿酒酵母等表达的重组人白蛋白，或者是水稻转基因表达的重组人白蛋白。重组人白蛋白经高度纯化后的成品，采用与药典规定的相同的制剂要求，其稳定性远远达不到人血清来源的人白蛋白。为此，申请号为CN201610017874.7的中国专利申请公开了采用在药典标准处方的基础上添加吐温80或吐温20方法阻止重组人白蛋白聚合物的产生。