[发明专利]一种DNA文库构建方法

权利要求书

1.一种DNA文库构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将DNA片段5’末端去磷酸化；其中，所述的DNA片段是具有不同末端的天然DNA；

(2)提供接头混合物，所述接头混合物包括平末端接头和带有不同长度粘末端的接头；其中，所述带有不同长度粘末端的接头的粘末端包括5’粘末端和3’粘末端，且其长度为1-10bp；

(3)使所述接头混合物中接头的5’末端与去磷酸化的DNA片段3’末端连接；

(4)通过切口平移法使接头混合物中接头的3’末端与所述DNA片段5’末端相连；

其中，并且所述带有不同长度粘末端的接头的粘末端为随机核苷酸序列；

所述接头混合物中至少一个接头与DNA相连接的3’末端具有SpC3封闭物或经修饰的核苷酸，所述经修饰的核苷酸是双脱氧胸苷、双脱氧胞苷、双脱氧鸟苷或者双脱氧腺苷。

2.权利要求1所述的DNA文库构建方法，其中，所述经修饰的核苷酸是双脱氧胸苷。

3.权利要求1或2所述的DNA文库构建方法，其中，所述方法在步骤(4)通过切口平移法使接头混合物中接头的3’末端与所述DNA片段5’末端相连之后，还包括步骤(5)：对与接头相连接的DNA片段进行扩增。

4.权利要求1所述的DNA文库构建方法，其中，所述带有不同长度粘末端的接头的粘末端的长度为1-9bp，1-8bp，1-7bp，1-6bp，1-5bp，1-4bp，1-3bp，1-2bp或1bp。

5.权利要求1所述的DNA文库构建方法，其中，所述接头混合物中至少一个接头与DNA相连接的3’末端具有SpC3封闭物，并且所述接头的粘末端的长度为2bp或3bp。

6.权利要求1所述的DNA文库构建方法，其中，所述接头混合物中至少一个接头包含单分子标记和/或样本标签。

7.权利要求1所述的DNA文库构建方法，其中所述接头混合物中至少一个接头中与DNA片段相连端相对的另一端被环形序列封闭。

8.权利要求1所述的DNA文库构建方法，其中所述接头混合物中至少一个接头的总长度为21-53bp，21-54bp，21-55bp，21-56bp，21-57bp，22-54bp，23-55bp，24-56bp，25-57bp，21-87bp，22-88bp，23-89bp，24-90bp，25-91bp，26-92bp，27-93bp，28-94bp，29-95bp，或30-96bp。

9.权利要求1所述的DNA文库构建方法，其中所述接头混合物中至少一个接头与DNA相连接的3’末端具有经修饰的核苷酸，所述经修饰的核苷酸是双脱氧胸苷，并且5'突出端的长度为0、1、2、3或4bp。

10.权利要求1所述的DNA文库构建方法，其中在步骤(3)中，通过使用连接酶将所述接头混合物中接头的5’末端与去磷酸化的DNA片段的3’末端相连接。

11.权利要求1所述的DNA文库构建方法，其中在步骤(4)反应前，还包括：往反应物中添加5’端接头单链核苷酸的步骤，其中所述5’端接头单链是指与目标DNA的5’端相连接的单链。

12.一种用于构建DNA文库的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括接头混合物，所述接头混合物包括平末端接头和带有不同长度粘末端的接头；

其中，所述带有不同长度粘末端的接头的粘末端包括5’粘末端和3’粘末端，且其长度为1-10bp；

其中，并且所述带有不同长度粘末端的接头的粘末端为随机核苷酸序列；

所述接头混合物中至少一个接头与DNA相连接的3’末端具有SpC3封闭物或经修饰的核苷酸，所述经修饰的核苷酸是双脱氧胸苷、双脱氧胞苷、双脱氧鸟苷或者双脱氧腺苷。