[发明专利]利用线粒体DNA控制区进行黄鲫遗传学分析的方法

权利要求书

1.利用线粒体DNA控制区进行黄鲫遗传学分析的方法，其特征在于：包括如下步骤：

在黄鲫肌肉组织样本中加入裂解液进行裂解，然后分离上清液，获得线粒体基因组DNA；

将所述线粒体基因组DNA进行靶序列的筛查；

从筛查结果进行黄鲫遗传学分析；

其中，所述裂解液为包含NaOH、Tris-HCl、EDTA、甘氨胆酸钠和二巯基丙醇的水溶液；

所述靶序列包括线粒体DNA控制区中的整体或部分。

2.根据权利要求1所述的利用线粒体DNA控制区进行黄鲫遗传学分析的方法，其特征在于：所述裂解液中NaOH的终浓度0.3-0.4M、Tris-HCl的终浓度0.03-0.05M、EDTA的终浓度4.0-5.0M、甘氨胆酸钠的终浓度6.0-10.0mM，二巯基丙醇的终浓度0.2-0.5mM。

3.根据权利要求1或2所述的利用线粒体DNA控制区进行黄鲫遗传学分析的方法，其特征在于：所述线粒体基因组DNA的OD₂₆₀/OD₂₈₀在1.83-1.92之间，OD₂₃₀/OD₂₆₀在2.12-2.33之间。

4.根据权利要求1或2所述的利用线粒体DNA控制区进行黄鲫遗传学分析的方法，其特征在于：所述线粒体基因组DNA的浓度＞73.5ng/μL。

5.根据权利要求1所述的利用线粒体DNA控制区进行黄鲫遗传学分析的方法，其特征在于：所述筛查使用PCR扩增所述靶序列来实施。

6.根据权利要求5所述的利用线粒体DNA控制区进行黄鲫遗传学分析的方法，其特征在于：所述控制区前段高变区引物为:HJ primer-F：5’-CACGCACTTAGCTCCAAGCTA-3’；HJprimer-R：5’-GACGATACCAGAGTAGTGACG-3’。

7.根据权利要求5所述的利用线粒体DNA控制区进行黄鲫遗传学分析的方法，其特征在于：所述高变区控制区后半段引物为:HJH primer-F：5’-CAGTCTTCTCTATTCGTCTAG-3’；HJHprimer-R：5’-GTTAGCGAGCTTGATTGCTG-3’。

8.根据权利要求5所述的利用线粒体DNA控制区进行黄鲫遗传学分析的方法，其特征在于：所述PCR反应体系：rTaq 0.25μL，DNA模板2μL，primer-F 1μL，primer-R 1μL，DNTP 2μL，10×PCRbuffer 2μL，去离子水16.75μL。

9.根据权利要求5所述的利用线粒体DNA控制区进行黄鲫遗传学分析的方法，其特征在于：所述PCR扩增程序为：95℃变性5min；95℃30s，52℃405s，72℃40s，40个循环；72℃延伸5min，4℃保存。