[发明专利]一种适用于细菌FISH检测的杂交缓冲液体系及其原位杂交方法

权利要求书

1.一种适用于细菌FISH检测的杂交缓冲液，其特征在于，各组分配方包括：去离子甲酰胺、SSC、EDTA、Denhardt、NaH₂PO₄ 和DEPC水。

2.根据权利要求1所述的适用于细菌FISH检测的杂交缓冲液，其特征在于，所述杂交缓冲液中各组分的配比为：15%去离子甲酰胺、2×SSC、0.5M EDTA、5×Denhardt、50mMNaH₂PO₄。

3.权利要求1~2任一所述适用于细菌FISH检测的荧光原位杂交方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）组织切片预处理，包括：组织切片固定、脱蜡、水洗、通透、消化；

（2）预杂交：向经步骤（1）预处理后的组织切片滴加所述杂交缓冲液，37℃孵育1小时，倾倒去除杂交缓冲液；

（3）杂交：在组织切片上滴加含标记的寡核苷酸探针的杂交液缓冲液，盖上盖玻片，37℃杂交过夜；

（4）洗涤：用SSC洗脱液洗去杂交液；

（5）复染细胞核及封片，在荧光显微镜下观察荧光信号，采集图像。

4.根据权利要求1所述的荧光原位杂交方法，其特征在于，所述组织切片脱蜡至水洗的具体过程为：依次将组织切片放入二甲苯Ⅰ15min，二甲苯Ⅱ15min，无水乙醇Ⅰ5min，无水乙醇Ⅱ5min，85%酒精（体积浓度）5min，75%酒精（体积浓度）5min，DEPC水洗。

5.根据权利要求1所述的荧光原位杂交方法，其特征在于，所述组织切片通透的具体过程为：将组织切片置于1×修复液中90℃、5~10分钟，随后自然冷却；所述修复液为DEPC和水按1:19稀释所得。

6.根据权利要求1所述的荧光原位杂交方法，其特征在于，所述组织切片消化的的具体过程为：滴加蛋白酶K工作液消化15~20min。

7.根据权利要求1所述的荧光原位杂交方法，其特征在于，步骤（4）所述洗涤的具体过程为：2×SSC，37℃洗10min；1×SSC，37℃洗2×5min；0.5×SSC室温洗10min。