[发明专利]一种vp19和vp28穿梭载体转基因蓝藻的构建方法及其用途在审
| 申请号： | 201910877034.1 | 申请日： | 2019-09-17 |
| 公开（公告）号： | CN110577922A | 公开（公告）日： | 2019-12-17 |
| 发明（设计）人： | 贾睿;朱婵;徐杨;施定基;何培民 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/34;C12N15/74;A23K10/16;A23K50/80;A23K40/30;A23K40/10;A23K40/00;A61K35/748;A61P31/20;C12R1/01 |
| 代理公司： | 31227 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 | 代理人： | 周一新 |
| 地址： | 201306 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 穿梭载体 构建 质粒 对虾白斑综合症病毒 对数生长中期 设计扩增引物 南美白对虾 转基因蓝藻 抵抗 基因组DNA 对虾养殖 口服制剂 蓝藻培养 融合基因 有效活性 有效药物 接合 野生型 转化子 蓝藻 筛选 转入 | ||
1.一种vp19和vp28穿梭载体转基因蓝藻的构建方法，其特征在于，构建vp19和vp28的穿梭载体后转录入蓝藻得到，其构建方法包括以下步骤：
(ⅰ)以对虾白斑综合症病毒的基因组DNA为模板，设计扩增引物对如SEQ ID.NO.1至SEQID.NO.4所示，用PCR法扩增获得vp19和vp28融合基因，其碱基序列如SEQ ID.NO.5所示；
(ⅱ)步骤(ⅰ)所得vp19和vp28融合基因和pRL489质粒连接，构建vp19和vp28穿梭载体并转入大肠杆菌，得到含有pRL489-vp19-vp28质粒的大肠杆菌；
(ⅲ)将含有pR4-pRL-542质粒的大肠杆菌、步骤(ⅱ)获得的含有pRL489-vp19-vp28质粒的大肠杆菌和纯化后的野生型蓝藻培养到对数生长中期，并按照细胞数量比为5:5:1混合，通过三亲接合转移用所述vp19和vp28穿梭载体转化蓝藻，并筛选蓝藻转化子；
(ⅳ)步骤(ⅲ)所得蓝藻转化子继续培养，得到vp19和vp28穿梭载体转基因蓝藻。
2.如权利要求1所述vp19和vp28穿梭载体转基因蓝藻的构建方法，其特征在于，还包括所述vp19和vp28穿梭载体转基因蓝藻经沉淀、离心、收集、洗涤、冷冻干燥和粉碎的后处理步骤。
3.如权利要求1所述vp19和vp28穿梭载体转基因蓝藻的构建方法，其特征在于，所述蓝藻为聚球藻。
4.权利要求1-3任一项所述vp19和vp28穿梭载体转基因蓝藻在增强南美白对虾抵抗WSSV的用途，其特征在于，通过以所述vp19和vp28穿梭载体转基因蓝藻为有效活性成分的口服制剂实现，且所述vp19和vp28穿梭载体转基因蓝藻的有效使用剂量为1～20μg/尾。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述vp19和vp28穿梭载体转基因蓝藻的有效使用剂量为10～20μg/尾。
6.如权利要求4或5所述的用途，其特征在于，所述口服制剂的剂型包括粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂或丸剂。
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