[发明专利]一种金枪鱼鱼卵卵磷脂制备方法

权利要求书

1.一种金枪鱼鱼卵卵磷脂制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)酶解：金枪鱼鱼卵匀浆液中加入蒸馏水，再加入 1.8～2.5%的胰蛋白酶酶解，灭活后离心去上清；

2)浸提：酶解后的滤饼中加入丙酮，25℃磁力搅拌 10min，抽滤，用丙酮浸提 4～6 次，至丙酮不变色；

3)二次浸提：浸提后的滤饼中加入无水乙醇，维持 25～30℃，在提供 440～460W 功率微波条件下间断微波浸提，间断微波浸提具体指按照微波10s:关闭微波 5～7min 的间断微波方式完成总时长 90～120s 的微波浸提、共计时长 50～80min 的浸提；

4)纯化：硅胶层析柱中填充 100～200 目硅胶，预设静置沉降完成后将含有卵磷脂粗品的 CHCl₃-CH₃OH 混合溶液上样，以 CHCl₃-CH₃OH混合液为洗脱液，CHCl₃-CH₃OH混合液中CHCl₃和CH₃OH的比例为2:1，流速为 30～45 滴/min 对其进行洗脱，收集洗脱液并干燥即得卵磷脂纯品。

2. 根据权利要求 1 所述的方法，其特征在于：在进行步骤 3)二次浸提时，无水乙醇的添加量是滤饼体积的 10.3～14.3 倍。

3. 根据权利要求 1 所述的方法，其特征在于：在进行步骤 4)纯化时，硅胶需置于120℃烘箱中活化过夜，放真空干燥箱中降温，冷却后置于 CHCl3浸泡 12h。

4. 根据权利要求 1～3 任一项所述的方法，其特征在于：在进行步骤 4)纯化时，需将活化后的硅胶搅拌均匀，加入层析柱内，硅胶沉降完全后打开活塞，慢慢流出 CHCl₃，以胶头滴管继续滴加硅胶，当层析柱内硅胶距离上端约 6cm，停止加硅胶，静置沉降 12h；之后方可上样。