[发明专利]一种金枪鱼鱼卵卵磷脂制备方法

说明书

本发明关于一种金枪鱼鱼卵卵磷脂制备方法，包括：1)酶解：金枪鱼鱼卵匀浆液中加入蒸馏水和胰蛋白酶酶解，灭活后离心去上清；2)浸提：酶解后的滤饼中加入丙酮，搅拌、抽滤，用丙酮浸提至丙酮不变色；3)二次浸提：浸提后的滤饼中加入无水乙醇，间断微波浸提；4)纯化：以CHCl₃‑CH₃OH(2:1)混合液为洗脱液将卵磷脂粗品进行硅胶层析柱纯化，收集洗脱液并干燥即得卵磷脂纯品。本方法可加快游离磷脂的萃取速度，提高萃取率，再经硅胶层析柱纯化即得卵磷脂成品，在显著提高卵磷脂提取率的基础上增加纯度，利于其进一步的直接应用，金枪鱼鱼卵卵磷脂可应用于对人肝癌HepG2细胞的抑制及对Chang liver细胞的降脂。

技术领域

本发明关于鱼卵卵磷脂技术领域，特别是关于一种金枪鱼鱼卵卵磷脂制备方法。

背景技术

磷脂(Phospholipid)，也称磷脂类、磷脂质，是指含有磷酸的脂类，属于复合脂。磷脂组成生物膜的主要成分，分为甘油磷脂与鞘磷脂两大类，分别由甘油和鞘氨醇构成。磷脂是生命基础物质，对活化细胞，维持新陈代谢，基础代谢及荷尔蒙的均衡分泌，增强人体的免疫力和再生力，都能发挥重大的作用。另外，磷脂还具有促进脂肪代谢，防止脂肪肝，降低血清胆固醇、改善血液循环、预防心血管疾病的作用。

金枪鱼鱼卵为金枪鱼加工废弃物，含有大量的磷酯类物质，但并未进行利用。基于此，申请人以金枪鱼鱼卵为材料制备卵磷脂类成分，建立起成熟的制备工艺。

以上背景技术内容的公开仅用于辅助理解本发明的发明构思及技术方案，其并不必然属于本专利申请的现有技术，在没有明确的证据表明上述内容在本专利申请的申请日已经公开的情况下，上述背景技术不应当用于评价本申请的新颖性和创造性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种金枪鱼鱼卵卵磷脂制备方法，可加快游离磷脂的萃取速度，提高萃取率，缩短萃取时间，再经硅胶层析柱纯化即得卵磷脂成品，在显著提高卵磷脂提取率的基础上增加纯度，利于其进一步的直接应用，金枪鱼鱼卵卵磷脂可应用于对人肝癌HepG2细胞的抑制及对Chang liver细胞的降脂。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案包括下述方面。

第一个方面，一种金枪鱼鱼卵卵磷脂制备方法，包括以下步骤：

1)酶解：金枪鱼鱼卵匀浆液中加入蒸馏水，再加入1.8～2.5％的胰蛋白酶酶解，灭活后离心去上清；通过胰蛋白酶酶解，将于卵磷脂纠缠的蛋白质降解，从而促进卵磷脂的解离，为其进一步的浸提提供有利条件；通过蛋白酶的酶解作用，将脂类复合体之间的连接键进行破坏，促进油脂的释放，提升磷脂提取率；水酶解法作用的优势为在酶解提高磷脂提取率的同时，还可获得具有生物活性的水解蛋白，这是其它磷脂提取工艺无法比拟的；

2)浸提：酶解后的滤饼中加入丙酮，25℃磁力搅拌10min，抽滤，用丙酮浸提4～6次，至丙酮不变色；根据卵磷脂不溶于丙酮，而其他磷脂及脂肪酸溶于丙酮的特性，将处于解离状态的磷脂进行首次浸提；

3)二次浸提：浸提后的滤饼中加入无水乙醇，维持25～30℃，在提供440～460W功率微波条件下间断微波浸提；然后进行抽滤、浓缩、加入丙酮沉淀、离心、真空干燥，既得卵磷脂粗品；以微波辅助无水乙醇进行二次浸提，能够利用电磁波穿透浸提液到达样品内部，内部物质吸收能量，细胞内部的温度迅速提升，导致细胞膜被涨破，细胞膜中的卵磷脂得以释放，由于高频电磁波的震荡和萃取液因吸收微波能温度提升的原因，进一步加快被萃取组分扩散，加速萃取组分和萃取液的结合，微波萃取法具有提取时间短、溶剂用量少、提取率高、选择性好、节能以及劳动强度低等一系列优点；