[发明专利]一种无糖小分子肽粉的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种无糖小分子肽粉的制备方法，其特征在于，包括步骤：

S1、贻贝水提粗蛋白的制备：取贻贝肉6000～12000rpm、匀浆3～10min，得贻贝浆，加水，1～25℃静置2～8h，离心取上清液A，得到的水提粗蛋白；其中，所述贻贝浆和水的重量体积比为：1:3～5g/mL；

S2、脱盐：将步骤S1所述水提粗蛋白离心，收集上清液B，将所述上清液B用500～3500D的透析袋和水进行透析脱盐，得到水提脱盐贻贝蛋白；将所述水提脱盐贻贝蛋白进行冷冻干燥，得到水提脱盐的贻贝蛋白冻干粉；

S3、酶解：将步骤S3所述水提脱盐的贻贝蛋白冻干粉，按料液重量比1:30～100加水复溶成溶液A，向所述溶液A中加入中性蛋白酶，30～60℃搅拌酶解2～6小时，所得酶解产物溶液为具有成骨活性的贻贝混合肽；其中，所述中性蛋白酶的添加量以所述溶液A中水提脱盐的贻贝蛋白冻干粉总重量为基准，每克水提脱盐的贻贝蛋白冻干粉加入中性蛋白酶3000～6000U；

S4、醇沉：取步骤S3所述具有成骨活性的贻贝混合肽，使用3KDa的超滤离心管进行超滤离心，取通过超滤离心管的穿透液，即分子量在3KDa以下的溶液，加入所述穿透液3～10倍体积的无水乙醇，静置18～24h，离心取上清液C；将所述上清液C置于60～75℃旋转蒸发至原体积的1/5～1/10，得溶液B；干燥，得无糖小分子肽粉；其中，所述干燥为冷冻干燥或喷雾干燥。

2.根据权利要求1所述无糖小分子肽粉的制备方法，其特征在于，步骤S2所述离心具体为：6000～12000g、5～30min。

3.根据权利要求1所述无糖小分子肽粉的制备方法，其特征在于，步骤S2所述透析具体为：将所述上清液B置于500～3500D的透析袋中，使用双蒸水对其进行透析，所述双蒸水的用量为上清液B体积的100～150倍，每6～12h更换一次双蒸水，共透析24～36h。

4.根据权利要求1所述无糖小分子肽粉的制备方法，其特征在于，步骤S2所述冷冻干燥的时间-温度程序设置如下，第一段：-60℃～-50℃预冻3～5小时，第二段：-45℃～-40℃冷冻1～3小时，第三段：-30℃～-25℃冷冻1～2小时，第四段：-10℃～-5℃冷冻1～2小时，第五段：5℃～15℃干燥1～2小时，第六段：15℃～20℃干燥1～2小时，第七段：20℃～25℃干燥1～2小时；在第二段进行抽真空，所述第二段至第七段的真空度为15Pa；真空泵启动温度为-60℃～-50℃，隔板温度设定为-30℃～-20℃。

5.根据权利要求1所述无糖小分子贻贝肽的制备方法，其特征在于，步骤S4所述超滤离心的参数为4000～8000rpm、10～30min。

6.根据权利要求1所述无糖小分子肽粉的制备方法，其特征在于，步骤S4所述离心参数为：8000～12000g、10～30min。

7.根据权利要求1所述无糖小分子肽粉的制备方法，其特征在于，步骤S4所述冷冻干燥的时间-温度程序设置如下，第一段：-60℃～-50℃预冻3～5小时，第二段：-45℃～-40℃冷冻1～3小时，第三段：-30℃～-25℃冷冻1～2小时，第四段：-10℃～-5℃冷冻1～2小时，第五段：5℃～15℃干燥1～2小时，第六段：15℃～20℃干燥1～2小时，第七段：20℃～25℃干燥1～2小时；在第二段进行抽真空，所述第二段至第七段的真空度为15Pa；真空泵启动温度为-60℃～-50℃，隔板温度设定为-30℃～-20℃。

8.根据权利要求1所述无糖小分子肽粉的制备方法，其特征在于，步骤S4所述喷雾干燥为常压喷雾干燥：喷雾干燥控制溶液中的固形物质量含量范围为30％～40％，设置进风温度150～220℃，物料温度控制在60～90℃。