[发明专利]一种具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，其特征在于，包括步骤：

S1、牡蛎浆液的制备：取牡蛎肉，按料液重量比1:3～1:5加水，0～4℃、4000～5000rpm匀浆，每次匀浆时间为1～2min，间歇时间为30～40s，总共匀浆3～5次，得牡蛎浆液；

S2、牡蛎浆液的一次酶解：将步骤S1所述牡蛎浆液的pH调节到2.0～4.0，加入胃蛋白酶，在温度30～37℃搅拌1～2小时，得酶解液A；其中，所述胃蛋白酶的添加量以所述牡蛎浆液中蛋白质的总含量为基准，每克蛋白质添加胃蛋白酶4500～5000U；

S3、牡蛎浆液的二次酶解：将步骤S2所述酶解液A的pH调节到6.5～8.2，加入胰酶，在温度30～37℃搅拌1～3小时，得酶解液B；将所述酶解液B离心，取上清液A；其中，所述胰酶的添加量以上述酶解液A中蛋白质的总含量为基准，每克蛋白质添加胰酶4500～5000U；

S4、乙醇沉淀：取步骤S3所述上清液A，加入其2～4倍体积的无水乙醇，在4～7℃静置24～48h，离心取上清液B；

S5、旋转蒸发：取步骤S4所述上清液B，置于30℃～45℃进行旋转蒸发至所述上清液B体积的1/10～1/15，得浓缩液；将所述浓缩液干燥，所得干燥的粉末为具有延缓骨质流失活性的多肽；其中，所述干燥为喷雾干燥或冷冻干燥。

2.根据权利要求1所述具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤S2所述搅拌的转速为45～60rpm。

3.根据权利要求1所述具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤S3所述离心的参数为：10000～12000g、8～10min。

4.根据权利要求1所述具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤S4所述离心的参数为：10000～12000g、8～10min。

5.根据权利要求1所述具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤S5所述冷冻干燥的时间-温度程序设置如下，第一段：-60℃～-50℃冷冻3～5小时，第二段：-45℃～-40℃冷冻1～3小时，第三段：-30℃～-25℃冷冻1～2小时，第四段：-10℃～-5℃冷冻1～2小时，第五段：5℃～15℃干燥1～2小时，第六段：15℃～20℃干燥1～2小时，第七段：20℃～25℃干燥24～48小时；在第二段抽真空，所述第二段至第七段真空度18～22Pa；真空泵启动温度为-60℃～-50℃，隔板温度设定为-30℃～-20℃。

6.根据权利要求1所述具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤S5所述喷雾干燥为常压高温喷雾干燥：喷雾干燥控制溶液中的固形物质量含量范围为30％～40％，设置进风温度150～220℃，物料温度控制在60～90℃。

7.根据权利要求1所述具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤S5所述喷雾干燥为低温喷雾干燥：低温喷雾干燥控制溶液中的固形物质量含量范围为15％～40％，真空度达到-0.01～0.06MPa，进风温度为95～145℃，物料温度控制在30～60℃。