[发明专利]一种具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，以牡蛎肉为原料，制备牡蛎浆液；依次经过胃蛋白酶酶解、胰酶酶解、乙醇沉淀、减压浓缩及干燥(冷冻干燥或喷雾干燥)，获得具有延缓骨质流失活性的多肽。本发明采用胃蛋白酶和胰酶对牡蛎浆液二次酶解，再使用乙醇除去糖类与蛋白，较好的减少活性多肽再降解，利于保留活性多肽的完整性，防止体内胃肠道酶导致的活性改变或降低；所得多肽对成骨细胞增殖率最高达到168％。通过体内实验证实，本发明开发了牡蛎组织的二次酶解工艺，逐步提高延缓骨质流失活性多肽的纯度，得到了一种具有延缓骨质流失活性的牡蛎多肽产品。所述延缓骨质流失活性多肽可用于预防骨质疏松等相关食品或药品的开发。

技术领域

本发明涉及水产品加工技术领域，更具体地说，涉及一种具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法及其应用。

背景技术

骨质疏松症是全世界关注的主要公共卫生问题。骨质疏松性骨折是最常见的致残原因之一，也是全球医疗费用的主要来源。据估计，目前全世界有2亿多人患有这种疾病，每年导致890多万例骨折。目前骨质疏松症治疗药物批准可以分为两类。第一类抵抗骨质再吸收药剂是最常用的治疗骨质疏松症药物，其中包括含氮磷酸盐，雷洛昔芬，激素替代疗法，降钙素。这些药物是通过抑制破骨细胞骨吸收，这些疗法能够改善骨质疏松症患者的生活质量，但是不能恢复大多数骨质疏松症患者的骨骼完整性。第二类是骨合成类药物，一般用于严重的骨质疏松症患者，也很难用于对前期骨质减少的预防，或着缓解骨质疏松的进程。因骨质疏松发病早期基本没有什么不良反应，因而不易被发现，不能及时的进行治疗，但是一旦发病将会很难治愈。外科手术以及目前常见的的预防和治疗骨质疏松的药物，长期服用这类药物会引起便秘等一系列不适反应症状，不仅医疗成本高，而且会有一定的毒副作用，并且很难达到彻底治愈的目的。2018年的中国医学会骨质疏松与骨矿盐疾病学分会发布的中国骨质疏松症患者的调查报告表明，骨质疏松的预防意义要大于治疗收益。因此，如何转变骨质疏松的治疗思路为可预防的手段是提高国民骨骼健康的新途径。

多肽对许多疾病作为潜在类似药物使用正在快速增长。多肽是一类化合物体内目标结合具有更强的特异性，使得其生物活性更高效和更好的适用性，且其无关的副作用也更有限。与蛋白质相比，肽类的小分子尺寸跟小，完善的多肽化学合成方法提供了更多和更经济的产量。此外肽的较短长度表明他们的使用不仅在系统性注射也为医学临床方便药片口服诱导骨生长刺激。牡蛎是一种营养丰富的水产品。其每百克鲜贝肉含蛋白质7克，糖3.9克，灰分1.4克，脂肪2.5克，其蛋白质含量很高。牡蛎蛋白的营养价值高且具有良好的抗氧化活性，抗凝血及抗肿瘤活性。值得一提的是，牡蛎的营养价值高还由于它所含的蛋白质有人体需要的缬氨酸、亮氨酸等8种必需氨基酸。越来越多的水产蛋白的水解产物被发现具有各种的生物活性。

常用的酶解方法得到的多肽在体内发挥生物功效存在一些缺点，因为人异源消化酶的多肽被食用后可能会被胃肠道中蛋白酶的二次或者多次水解，很难保证原始多肽的生物活性。很多多肽在体外活性测试得到的效果在体内会有所降低。而经过胃肠道同源蛋白酶水解的多肽可以较好的减少其再水解的可能性，有利于保留原始的完整性，防止体内胃肠道酶导致的活性改变或降低。

发明内容

本发明的目的是克服现有异源酶水解的多肽体内活性降低技术的缺点，以牡蛎(Crassostrea gigas)为原料，提供一种具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，并开发了具有延缓骨质流失活性的多肽产品。

为了达到上述目的，本发明提供一种具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，包括步骤：

S1、牡蛎浆液的制备：取牡蛎肉，按料液重量比1:3～1:5加水，0～4℃匀浆，匀浆转速4000～5000rpm，每次匀浆时间为1～2min，间歇时间为30～40s，总共匀浆3～5次，得牡蛎浆液；