[发明专利]一种一步法定量检测犬瘟热病毒-犬细小病毒抗体的化学发光试剂盒

权利要求书

1.一种一步法定量检测犬瘟热病毒-犬细小病毒抗体的化学发光试剂盒，其特征在于：由抗犬IgG免疫磁珠、荧光反应液、样本处理液、洗涤液组成；

其中，所述抗犬IgG免疫磁珠为带有官能团修饰的直径100-300nm的超顺磁珠与抗犬IgG的共价偶联物，其中所用磁珠为羧基磁珠、氨基磁珠、羟基磁珠、苯甲磺酰基磁珠、亲水磁珠、疏水磁珠中的一种或几种；所述抗犬IgG为鼠抗犬IgG单抗；所述的荧光反应液为FITC标记的犬细小病毒抗原和PE-Cy5标记的犬瘟热病毒抗原按1:1质量比混合而成；所述样本处理液为含有0.1％防腐剂、0.1％阻断剂的0.95％NaCl溶液；所述洗涤液为含0.05％Tween-20的PBS缓冲液。

2.根据权利要求1所述一步法定量检测犬瘟热病毒-犬细小病毒抗体的化学发光试剂盒，其特征在于：所述抗犬IgG免疫磁珠的制备方法为：吸取浓度为1mg/mL的羧基免疫磁珠1mL到离心管中，将离心管置于磁力架中将磁珠和缓冲液分离，用0.1M pH5.0的2-(N-吗啡啉)乙磺酸洗涤磁珠4-8次，在上述洗涤后的磁珠中加入0.1M pH5.0的2-(N-吗啡啉)乙磺酸溶液100-500uL重悬，加入10mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸溶液和50mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺各100-500uL，室温震荡活化，将活化好的磁珠置于磁力架上，弃上清，向磁珠中加入100-500ug鼠抗犬IgG单抗，室温持续旋转孵育60-120min，置于磁力架上，弃上清，收集免疫磁珠，加入含5％BSA的0.05M Tris-Cl缓冲液500-1000uL重悬磁珠，Tris-Cl缓冲液的pH为8.0，反应30-60min，置于磁力架上，弃上清，加入保存液500-1000uL。

3.根据权利要求2所述一步法定量检测犬瘟热病毒-犬细小病毒抗体的化学发光试剂盒，其特征在于：所述保存液为含5％BSA、3％蔗糖、0.05％Tween-20的0.05M Tris-Cl缓冲液，其中，Tris-Cl缓冲液的pH为8.0。

4.根据权利要求1所述一步法定量检测犬瘟热病毒-犬细小病毒抗体的化学发光试剂盒，其特征在于：所述FITC标记的犬细小病毒抗原和PE-Cy5标记的犬瘟热病毒抗原均由以下方法制备而成：将病毒抗原用0.05M CBS缓冲液稀释至蛋白浓度为20mg/mL，混匀，将三角烧瓶置冰槽中，电磁搅拌5-10min；边搅拌边将荧光素渐渐加入病毒抗原溶液中，5-10min内加完，避免将荧光素粘于瓶壁或搅拌玻璃棒上；加毕后，继续4℃避光搅拌过夜；结合完毕后，将混合溶液2500rpm离心20min除去沉淀物，装入透吸袋中后再置于烧杯中，用pH8.0Tris-Cl缓冲液4℃透析过夜；取透析过夜的标记物，过葡萄糖凝胶G-25柱，调整浓度为3～6mg/mL，分装、贮存于4℃冰箱。

5.根据权利要求4所述一步法定量检测犬瘟热病毒-犬细小病毒抗体的化学发光试剂盒，其特征在于：所述荧光素的加入量为0.01mg/mg病毒抗原。