[发明专利]一种一步法定量检测犬瘟热病毒-犬细小病毒抗体的化学发光试剂盒

说明书

本发明公开了一种一步法定量检测犬瘟热病毒‑犬细小病毒抗体的化学发光试剂盒，属于生物检测技术领域。本发明的一种一步法定量检测犬瘟热病毒‑犬细小病毒抗体的化学发光试剂盒，由抗犬IgG免疫磁珠、荧光反应液、样本处理液、洗涤液组成；其中，所述的荧光反应液为不同荧光标记的犬细小病毒抗原和犬瘟热病毒抗原溶液。本发明的检测试剂盒可快速、准确的同时鉴别诊断犬瘟热病毒抗体和犬细小病毒抗体水平，具有特异性强、灵敏度高、重复性好、操作简便等特点，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种一步法定量检测犬瘟热病毒-犬细小病毒抗体的化学发光试剂盒。

背景技术

近几年，随着我国军犬、警犬、实验用犬和宠物犬饲养量的增加，异地交流增多，犬瘟热和犬细小病毒病在我国犬中的发病率和致死率均有上升趋势。犬瘟热与犬细小病毒病都是急性、高发性传染病，而且都表现为高热、呕吐、腹泻等相似症状。犬瘟热(CD)是由犬瘟热病毒(CDV)感染引起的世界范围内广泛发生的一种犬的急性、高接触性病毒传染病，CDV隶属于副黏病毒科麻疹病毒属，其自然宿主包括大部分的食肉目动物。CD主要发生于幼犬，早起表现为早期双相热、急性鼻卡他、支气管炎、卡他性肺炎、严重肠胃炎，有些患病动物足垫增厚、鼻部角质化等，容易引起细菌或其他病毒混合感染或继发感染，有的患病动物康复后留有麻痹、抽搐、癫痫样发作等后遗症，发病率90％以上，死亡率达50％。临床症状多样，是犬养殖业中危害最大的传染病。除犬科动物外，鼬科、浣熊科及大熊猫科等多种动物均可感染发病，CDV对宠物饲养、经济动物养殖及动物园观赏动物产生严重危害。犬细小病毒病是由犬细小病毒(CPV)感染引起的高度的接触性传染病，分肠炎型和心肌炎型，各种年龄的犬均可感染。但以刚断乳至90日龄的犬发病较多，发病率50-100％，死亡率达到50％。幼犬有的突然呼吸困难，心力衰竭，短时间内可呈现心肌炎症状而突然死亡。据临床发病犬的种类来看，纯种犬及外来犬比土种犬发病率高。本病一年四季均可发生，但以天气寒冷的冬春季多发。病犬的粪便中含毒量最高。常规免疫接种一种有效的预防犬瘟热和犬细小病毒病的保护措施，因此，体内抗体水平的高低决定动物机体抗感染能力强弱。

目前，常规抗体检测多采用ELISA法、免疫层析法等，ELISA法检测技术要求高，需要专业技术人员，适于批量检测而不适于个体快速多项检验，胶体金免疫层析技术具有快速简便优点，但也存在灵敏度低、准确性重复性较差、难以进行定量等缺点。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种一步法定量检测犬瘟热病毒-犬细小病毒抗体的化学发光试剂盒，该试剂盒可用于犬疫苗免疫的鉴别诊断和评估疫苗免疫效果，检测灵敏度高、特异性强，重复性和稳定性佳，使用快捷方便，具有良好的应用前景。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种一步法定量检测犬瘟热病毒-犬细小病毒抗体的化学发光试剂盒，由抗犬IgG免疫磁珠、荧光反应液、样本处理液、洗涤液组成；

其中，所述的荧光反应液为不同荧光标记的犬细小病毒抗原和犬瘟热病毒抗原溶液。

在上述方案的基础上，所述样本处理液为含有0.1％防腐剂、0.1％阻断剂的0.95％NaCl溶液。

在上述方案的基础上，所述洗涤液为含0.05％Tween-20的PBS缓冲液。

在上述方案的基础上，所述抗犬IgG免疫磁珠为带有官能团修饰的直径100-300nm的超顺磁珠与抗犬IgG的共价偶联物，其中所用磁珠为羧基磁珠、氨基磁珠、羟基磁珠、苯甲磺酰基磁珠、亲水磁珠、疏水磁珠中的一种或几种；所述抗犬IgG为鼠抗犬IgG单抗。

在上述方案的基础上，所述抗犬IgG免疫磁珠的制备方法为：