[发明专利]一种检测猪伪狂犬病毒抗体的试剂盒

权利要求书

1.一种检测猪伪狂犬病毒抗体的试剂盒，其特征在于：包括反应液和反应装置两部分；所述反应装置包括顶部敞口的盒体(1)，盒体的敞口上扣装有扣罩(2)，扣罩(2)内安装试纸板(3)且扣罩(2)倾斜设置，扣罩(2)的低端通过弹片(4)连接在盒体(1)上、扣罩(2)的高端设置反应键(5)，扣罩(2)上在靠近反应键(5)的位置上开设加样孔(6)；所述试纸板(3)包括PVC底衬板(7)、硝酸纤维素膜(8)、吸水垫(9)和样品处理垫(14)，硝酸纤维素膜(8)、吸水垫(9)和样品处理垫(14)均粘贴在PVC底衬板(7)上且硝酸纤维素膜(8)位于中部、样品处理垫(14)和吸水垫(9)分别搭接在硝酸纤维素膜(8)的高端和低端，硝酸纤维素膜(8)的中部平行设有一条包被有猪伪狂犬病毒gE重组蛋白的检测线(L-T1)、一条包被有猪伪狂犬病毒gB重组蛋白的检测线(L-T2)和一条包被有鼠抗羊IgG二抗的质控线(L-C)，扣罩(2)上开设有正对硝酸纤维素膜(8)中部的观察窗(13)；盒体(1)的内部设置有试剂槽(10)，试剂槽(10)位于PVC底衬板(7)贴有样品处理垫(14)一端的正下方，试剂槽(10)内盛装有反应液，试剂槽(10)的开口上封装有密封薄膜(11)，PVC底衬板(7)的底面上连接有可在反应键按下时将密封薄膜(11)刺破的钩刺(12)。

2.根据权利要求1所述检测猪伪狂犬病毒抗体的试剂盒，其特征在于：所述样品处理垫(14)包括经处理液处理后的全血滤膜和经红细胞单抗处理液处理后的玻璃纤维膜，玻璃纤维膜设置于外层，全血滤膜设置于内层；所述玻璃纤维膜和全血滤膜于室温相对湿度不高于30％的条件下密封干燥处理。

3.根据权利要求2所述检测猪伪狂犬病毒抗体的试剂盒，其特征在于：所述处理液为含有0.1-1％Tween-20、0.1-5％BSA和0.5-2％阻断剂的0.02M、pH7.0-8.0的Tri-Cl缓冲液；所述红细胞单抗处理液为含有0.1-1％Tween-20、0.1-5％BSA和0.5-5mg/mL抗-Hb单抗的0.02M、pH7.0-8.0的Tri-Cl缓冲液。

4.根据权利要求1所述的猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：所述检测线L-T1、检测线L-T2和质控线L-C由喷膜仪以1-2μL/cm喷速、0.5cm间距在硝酸纤维素膜上平行划线形成，喷膜仪用到的溶液分别为猪伪狂犬病毒gE重组蛋白溶液、猪伪狂犬病毒gB重组蛋白溶液和鼠抗羊IgG二抗溶液；其中，所述猪伪狂犬病毒gE重组蛋白溶液、猪伪狂犬病毒gB重组蛋白溶液和鼠抗羊IgG二抗溶液为猪伪狂犬病毒gE重组蛋白、猪伪狂犬病毒gB重组蛋白和鼠抗羊IgG二抗分别用0.02M、pH7.0的Tri-Cl缓冲液配制成的1-2mg/mL的包被溶液，喷线后的硝酸纤维素膜于室温相对湿度不高于30％的条件下干燥、密封保存。

5.根据权利要求1～4任一项所述猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：所述试剂槽中反应液的制备方法，包括如下步骤：

步骤1)取荧光微球经4000rpm离心30min，收集沉淀，用0.01M、pH5.0的硼酸盐缓冲液重悬，调整微球浓度为OD₄₅₀＝0.2，每毫升荧光微球重悬液分别加入浓度为10mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺200μL和浓度为30mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺80μL，震荡混匀，室温活化45min，得到初级产品；

步骤2)将初级产品经4000rpm离心30min，沉淀用0.05M、pH9.5的CBS溶液重悬，调整微球浓度为OD_450nm为0.2，同时将羊抗猪IgG抗体用pH9.5的0.025M碳酸盐缓冲液透析过夜，按600-800μg/mg比例(即每mg荧光微球中加入600-800μg的羊抗猪IgG抗体)向荧光微球重悬液中加入羊抗猪IgG抗体，4℃搅拌过夜，加入NaBH₃CN至终浓度5mM，反应1.5h得到中级产品；

步骤3)在中级产品中加入等体积封闭液37℃封闭1h，用0.1M、pH7.8的Tri-Cl缓冲液洗涤3次，每次20min，最后用100μL样品缓冲液重悬制成荧光微球标记的羊抗猪IgG抗体反应液，4℃保存备用。

6.根据权利要求5所述的一种猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：所述封闭液为含有2-5％BSA的0.1M、pH7.0-8.0的Tri-Cl缓冲液；所述样品缓冲液为含有1-2％BSA、0.1-0.5％PEG2000、2-5％海藻糖的0.02M、pH7.0-8.0的Tri-Cl缓冲液。