[发明专利]特异性检测样本中HTLV-I前病毒DNA的引物及其应用

权利要求书

1.特异性检测样本中HTLV-I前病毒DNA的引物对，所述引物对包括正向引物5'-CCCGACCTACCTATGGATAATGCT-3'(SEQ ID NO:1)和反向引物5'-GGTTTTGTGGCAGTTGGTTAATACA-3'(SEQ ID NO:2)。

2.特异性检测样本中HTLV-I前病毒DNA的引物和探针组合，所述引物对包括正向引物和反向引物，其中正向引物是5'-CCCGACCTACCTATGGATAATGCT-3'(SEQ ID NO:1)，所述反向引物是5'-GGTTTTGTGGCAGTTGGTTAATACA-3'(SEQ ID NO:2)；所述探针的序列为5'-CCCTATGGACAATCAACC-3'(SEQ ID NO:3)，该探针的5’端标记报告荧光基团，3’端标记淬灭基团。

3.根据权利要求2的引物和探针组合，其中所述荧光探针的5’端标记的报告荧光基团为FAM，3’端标记的淬灭基团为NFQ-MGB或TAMRA。

4.根据权利要求1的引物对或根据权利要求2或3的引物和探针组合在检测样本中HTLV-I前病毒DNA中的应用。

5.根据权利要求1的引物对或根据权利要求2或3的引物和探针组合在制备检测样本中HTLV-I前病毒DNA的试剂中的应用。

6.根据权利要求4或5的应用，其中所述检测是qPCR检测或数字PCR检测。

7.特异性检测样本中HTLV-I前病毒DNA的试剂盒，该试剂盒包括根据权利要求1的引物对，或包括根据权利要求2或3的引物和探针组合。

8.根据权利要求7的试剂盒，所述试剂盒还包括选自qPCR反应液、无核酸酶高纯水、人源性基因组DNA标准品、阳性对照品、和阴性对照品中的任意一种或更多种试剂。

9.样本中HTLV-I前病毒DNA的检测方法，包括使用根据权利要求1的引物对，或使用根据权利要求2或3的引物和探针组合，对样本基因组DNA进行qPCR检测，根据qPCR检测结果定性检测或定量检测样本中是否存在HTLV-I前病毒DNA。

10.样本中HTLV-I前病毒DNA的检测方法，包括以下步骤：

(1)提取样本基因组DNA；

(2)使用根据权利要求1的引物对，或使用根据权利要求2或3的引物和探针组合，对DNA标准品和样本基因组DNA进行qPCR检测，其中DNA标准品是用具有HTLV-I前病毒DNA的基因组DNA配制的不同给定浓度的样品；

(3)用DNA标准品的qPCR检测结果制作标准曲线，拟合线性方程，其中R²≥0.99；且各标准品浓度的准确度(RE％)为-75％～150％，确定可稳定检测到的浓度最低点；

(4)结果判定：如果样本基因组DNA的qPCR结果中出现明显的扩增曲线；且样本基因组DNA的qPCR的Ct值小于浓度最低点的Ct值，则为阳性结果，即样本中存在HTLV-I前病毒DNA；如果无明显扩增曲线，或者有明显扩增曲线，但Ct值大于标准曲线浓度最低点的Ct值，则为阴性结果，即样本中不存在HTLV-I前病毒DNA。

11.根据权利要求10的方法，其中步骤(4)进一步包括：根据样本基因组DNA的Ct值和拟合的标准曲线，确定样本基因组DNA中具有HTLV-I前病毒DNA的基因组DNA的浓度。

12.样本中HTLV-I前病毒DNA的检测方法，包括以下步骤：

(1)提取样本基因组DNA；

(2)使用根据权利要求1的引物对，或使用根据权利要求2或3的引物和探针组合，对DNA标准品和样本基因组DNA进行qPCR检测，其中DNA标准品是用具有HTLV-I前病毒DNA的基因组DNA配制的不同给定浓度的样品；

(3)用DNA标准品的qPCR检测结果制作标准曲线，拟合线性方程，其中R²≥0.99；且各标准品浓度的准确度(RE％)为-75％～150％，确定可稳定检测到的浓度最低点；

(4)结果判定：根据样本基因组DNA的Ct值和拟合的标准曲线，确定样本基因组DNA中具有HTLV-I前病毒DNA的基因组DNA的浓度。