[发明专利]基于双重链置换和三向DNA结构检测妥布霉素的比色方法

权利要求书

1.基于双重链置换和三向DNA结构检测妥布霉素的比色方法，其特征在于：首先将序列T1和T2以相同的浓度混合，高温变性并退火形成双链，在妥布霉素存在的情况下，双链序列中T1的适配体部分识别妥布霉素并与之结合，使T2的3’端暴露出来，然后加入引物1、引物2、Nt.BstNBI切刻内切酶、Bsm DNA聚合酶和游离的脱氧核糖核苷三磷酸到反应体系中，BsmDNA聚合酶通过强链置换反应合成完全互补的双链，Nt.BstNBI切刻内切酶切割双链上的识别位点产生大量的报告探针；

其次将三条单链DNA S1、S2和S3经高温变性和退火形成的三向DNA结构与报告探针杂交，触发λ核酸外切酶辅助的环路扩增，使得报告探针再生并置换出大量含有G-四链体形成序列的S1链；

在加入血红素后，G-四链体/血红素催化ABTS^2-/H₂O₂发生显色反应， UV-vis分光光度计测量吸光度，利用吸光值与妥布霉素的浓度的线性关系计算样品中的妥布霉素含量；

所述T1、T2、引物1和引物2序列具体为：

T1: 5’-CTG CCG TGA CTA GGC ACT AGT CTC AAC GAG TCG CGT-3’；

T2: 5’-TTT TTT TTT TTT AGT CAT GCT TGA TGA CTC GTT GAC TTA TCC CAA TTGTCA CGG CAG-3’；

引物1: 5’- CTG CCG-3’ ；

引物2: 5’-TTT TTT TTT TTT AGT CAT GCT ACG CGA CTC G-3’；

所述S1、S2及S3序列具体为：

S1: 5’-P-TTT TTT TTT TTT AGT CAT GCT TCT CGG TGT GAC AGG CAA CTC CGG GTTGGG CGG GAT GG-3’；

S2: 5’-TTA ATT ATA ATA ACC AGT TGC CTG GAT GAT CGA GA-3’；

S3: 5’-P-TTT TTT TTT TTT AGT CAT GCT CCC ATC CCG CCC AAC CCC CTT ATT ATAATT AA-3’。

2.根据权利要求1所述基于双重链置换和三向DNA结构检测妥布霉素的比色方法，其特征在于：所述S1和S3为5’端修饰磷酸基团的DNA序列。