[发明专利]一种酶促低场核磁共振DNA传感器检测食源性致病菌的方法

权利要求书

1.一种酶促低场核磁共振DNA传感器检测食源性致病菌的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)根据食源性致病菌的基因组DNA序列设计并合成正向探针与反向探针；

2)将正向探针与磁纳米颗粒偶联，将反向探针用生物素进行标记；

3)提取食源性致病菌的基因组DNA，与磁纳米颗粒-正向探针偶联物以及生物素标记的反向探针进行杂交，磁分离后得到磁纳米颗粒-正向探针-DNA分子-反向探针复合物；

4)向步骤3)获得的复合物中加入链霉亲和素标记的碱性磷酸酶，利用生物素与链霉亲和素的特异亲和能力，形成磁纳米颗粒-DNA杂交双链-碱性磷酸酶的夹心复合物；

5)将抗坏血酸磷酸酯溶液加入到步骤4)得到的夹心复合物中，碱性磷酸酶催化抗坏血酸磷酸酯生成抗坏血酸，磁分离后向反应液中加入KMnO₄溶液，抗坏血酸将Mn(VII)还原成Mn(II)，低场核磁共振仪测定T₂值并计算待测样品中的致病菌含量。

2.如权利要求1所述酶促低场核磁共振DNA传感器检测食源性致病菌的方法，其特征在于：所述磁纳米颗粒是粒径为1000nm的COOH-MNPs。

3.如权利要求1所述酶促低场核磁共振DNA传感器检测食源性致病菌的方法，其特征在于：所述生物素为EZ-Link^TMSulfo-NHS-LC-LC-Biotin。

4.如权利要求1所述酶促低场核磁共振DNA传感器检测食源性致病菌的方法，其特征在于：步骤3)中所述基因组DNA的A₂₆₀/A₂₈₀比值为1.7～1.9。

5.如权利要求1所述酶促低场核磁共振DNA传感器检测食源性致病菌的方法，其特征在于：所述抗坏血酸磷酸酯溶液的浓度为15mM。

6.如权利要求1所述酶促低场核磁共振DNA传感器检测食源性致病菌的方法，其特征在于：所述反应液中抗坏血酸的浓度为100-400μM，所述KMnO₄溶液的浓度为0.25mM，所述反应液与KMnO₄溶液的体积比为1：1。

7.如权利要求1所述酶促低场核磁共振DNA传感器检测食源性致病菌的方法，其特征在于：所述碱性磷酸酶催化抗坏血酸磷酸酯生成抗坏血酸是在pH 7.0的纯水体系进行。