[发明专利]一种化学发光法定量检测阴道毛滴虫的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种化学发光法定量检测阴道毛滴虫的试剂盒，其特征在于，包括中性亲和素偶联磁微球、生物素化抗体、吖啶酯标记的抗体、样本稀释液、校准品、洗涤液和化学发光底物。

2.根据权利要求1所述的化学发光法定量检测阴道毛滴虫的试剂盒，其特征在于，所述中性亲和素偶联磁微球通过以下方法制备得到：取表面活性基团含有羧基的磁微球，然后在化学交联剂1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺作用下与含有氨基基团的中性亲和素形成中性亲和素偶联磁微球。

3.根据权利要求1所述的化学发光法定量检测阴道毛滴虫的试剂盒，其特征在于，所述生物素化抗体为生物素N-羟基丁二酰亚胺酯与阴道毛滴虫单克隆抗体偶联得到。

4.根据权利要求1所述的化学发光法定量检测阴道毛滴虫的试剂盒，其特征在于，所述吖啶酯标记的抗体为吖啶酯与阴道毛滴虫单克隆抗体偶联得到。

5.根据权利要求1所述的化学发光法定量检测阴道毛滴虫的试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液包括：二水合磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、吐温20、氯化钠和氯化钾，所述样本稀释液的浓度为：0.01-0.02mol/L，所述样本稀释液中吐温20的含量为0.01-0.05wt％。

6.根据权利要求5所述的化学发光法定量检测阴道毛滴虫的试剂盒，其特征在于，所述校准品通过以下方法制备得到：将已计数的阴道毛滴虫悬液用所述样本稀释液稀释为若干个校准品。

7.根据权利要求1所述的化学发光法定量检测阴道毛滴虫的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液包括：二水合磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、吐温20、氯化钠和氯化钾；所述洗涤液的浓度为：0.01-0.02mol/L，所述洗涤液中吐温20的含量为0.05-1wt％。

8.根据权利要求1所述的化学发光法定量检测阴道毛滴虫的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物包括A液和B液；A液包括双氧水和硝酸溶液，B液包括氢氧化钠和吐温100。

9.一种化学发光法定量检测阴道毛滴虫的方法，其特征在于，采用权利要求1-8任一所述的化学发光法定量检测阴道毛滴虫的试剂盒进行检测，所述方法包括以下步骤：

(1)依次加入中性亲和素偶联磁微球、生物素化抗体及待测样本在35-37℃中反应15-18min；然后加入吖啶酯标记的抗体在35-37℃反应15-18min，用洗涤液洗涤除去未参加反应的物质，加入化学发光底物，通过化学发光检测仪检测，得到待测样本的发光信号；

(2)利用样本稀释液和校准品制备阴道毛滴虫标准品，建立定量标准曲线；

(3)将步骤(1)中得到的所述待测样本的发光信号代入到步骤(2)中得到的定量标准曲线中，计算得到待测样本中阴道毛滴虫的数量。

10.根据权利要求9所述的化学发光法定量检测阴道毛滴虫的方法，其特征在于，步骤(2)中所述定量标准曲线的建立，包括以下步骤：

A.阴道毛滴虫平板计数法与光密度法关系曲线的建立：

配制不同浓度梯度的阴道毛滴虫菌悬浮液，并在600nm波长下分别测定吸光度值，将不同梯度的阴道毛滴虫菌悬浮液同时做稀释平板计数实验，将600nm处的吸光度值与阴道毛滴虫的浓度做线性回归，得出回归方程；

所述回归方程为：

y＝8.0009x-0.8995；R²＝0.9974；其中x为600nm处的吸光度值，y为阴道毛滴虫浓度，y的单位为：10⁶cfu/ml；

B.参考品的制备：

将阴道毛滴虫接种于液体培养基，离心去上清液，洗涤，稀释，在600nm波长下测量吸光度值，根据步骤A得到的回归方程，计数出制得的参考品浓度，分装冻存备用；

C.校准品的制备：

用样品稀释液将步骤B得到的参考品稀释至覆盖线性范围的若干浓度点，分装冻存备用；

D.校准品测试：

取不同浓度的步骤C得到的校准品进行化学发光检测，得到检测信号值；

E.定量校准曲线的建立：

根据校准品的制备浓度和化学发光值拟合生成校准曲线，得到所述定量标准曲线；

所述标准曲线方程为：

y＝0.0529x+43467；R²＝0.9983；其中x为阴道毛滴虫浓度，y为光信号值。