[发明专利]一种化学发光法定量检测阴道毛滴虫的试剂盒及其检测方法

说明书

本发明提供一种化学发光法定量检测阴道毛滴虫的试剂盒，在使用时，样本中的阴道毛滴虫抗原与试剂盒中的试剂反应生成中性亲和素微球‑捕获抗体‑抗原‑检测抗体‑吖啶酯复合物，洗涤除去未参加反应的物质，通过吖啶酯在碱性H₂O₂溶液中，分子受到过氧化氢离子进攻时，生成不稳定的二氧乙烷，二氧乙烷分解为CO₂和电子激发态的N‑甲基吖啶酮，当其回到基态时发出光子，利用发光信号测量仪器测量光量子产额进行测定。同时通过校准品，拟合定量标准曲线，通过将样本的光信号测定结果代入到定量标准曲线中，计算出阴道毛滴虫的浓度。通过本发明提供的试剂盒进行阴道毛滴虫定量检测，灵敏度高、特异性好，能够准确检测样本中阴道毛滴虫的浓度。

技术领域

本发明属于体外诊断技术领域，具体涉及一种化学发光法定量检测阴道毛滴虫的试剂盒及其检测方法。

背景技术

阴道毛滴虫(Trichomonias)是寄生在人体泌尿生殖道的有鞭毛的原虫生物，可引起阴道炎和尿道炎，是HIV感染和诱发宫颈癌的危险因素之一。女性妊娠中期感染阴道毛滴虫易发生早产、低重儿等。有文献认为滴虫感染是男性非淋球菌性尿道炎的重要病因之一。全世界每年阴道毛滴虫感染的发病人数为1.8亿，滴虫病被认为是最流行的性传播疾病。

目前，滴虫检查方法主要有病原学诊断、免疫学方法、分子生物学等。

病原学诊断包括湿片法、涂片染色法及培养法。湿片法即取阴道后穹隆分泌物、尿道分泌物、尿液沉淀物或前列腺液，用生理盐水直接涂片，湿片检查。该法检测结果易受样本处置方式及检测人员的技术熟练程度相关。涂片染色法敏感性不够高，且受大小与滴虫类似的颗粒干扰。培养法被认为是诊断滴虫的“金标准”，其敏感性高，但其培养耗时较长，临床应用较少。

分子生物学方法，主要采用核酸分子杂交技术或PCR技术，其敏感性和特异性均较高，但是其对实验条件要求较高，可能会有污染的问题，且成本较高。

常用的免疫学方法有ELISA法、直接荧光抗体法，乳胶凝集法、免疫层析试验，其敏感度较湿片法高。目前市场上一般为定性产品。

发明内容

为了解决以上的技术问题，本发明提供一种阴道毛滴虫定量分析的试剂盒及其检测方法，所述检测方法灵敏度高、线性范围广，所述试剂盒设备简单、操作方便、分析快、便于实现自动化。

本发明的目的在于提供一种化学发光法定量检测阴道毛滴虫的试剂盒。

本发明的另一目的在于提供一种利用上述的试剂盒定量检测阴道毛滴虫的方法。

根据本发明的目的，本发明提供一种化学发光法定量检测阴道毛滴虫的试剂盒，包括中性亲和素偶联磁微球、生物素化抗体、吖啶酯标记的抗体、样本稀释液、校准品、洗涤液和化学发光底物。

本发明提供的试剂盒用于定量检测阴道毛滴虫，当样本中含有阴道毛滴虫抗原时，中性亲和素偶联微球、生物素化抗体与抗原在37℃中进行反应，加入吖啶酯标记的检测抗体，形成中性亲和素微球-捕获抗体-抗原-检测抗体-吖啶酯复合物，用洗涤液除去未参加反应的物质，通过吖啶酯在化学发光底物中，分子受到化学发光底物中的氧化氢离子的进攻时，生成不稳定的二氧乙烷，此二氧乙烷分解为CO₂和电子激发态的N-甲基吖啶酮，当其回到基态时发出光子，利用发光信号测量仪器测量光量子产额进行定量测定，同时通过校准品，拟合定量标准曲线，通过将样本的光信号测定结果带入到定量标准曲线中，从而计算出阴道毛滴虫的浓度。

优选地，所述中性亲和素偶联磁微球通过以下方法制备得到：取表面活性基团含有羧基的磁微球，然后在化学交联剂1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺作用下与含有氨基基团的中性亲和素形成中性亲和素偶联磁微球。