[发明专利]一种鸭乙型肝炎病毒重组聚合酶等温扩增检测方法在审
| 申请号： | 201910894805.8 | 申请日： | 2019-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN111593138A | 公开（公告）日： | 2020-08-28 |
| 发明（设计）人： | 马秀丽;朱蕴暖;刘娜;黄兵;刘存霞;胡峰;郭效珍;李玉峰;于可响;宋敏训;艾武;亓丽红 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院家禽研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京国坤专利代理事务所(普通合伙) 11491 | 代理人： | 赵红霞 |
| 地址： | 250023 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 乙型肝炎 病毒 重组 聚合 等温 扩增 检测 方法 | ||
1.一种检测鸭乙型肝炎病毒的RPA引物对，包括上游引物和下游引物，其核苷酸序列如下所示，如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；
上游引物F：5’-GCCTTAGCCAATGTGTATGA-3’；
下游引物R：5’-GGTGGAACAGGAGTAGTAGT-3’。
2.权利要求1所述的RPA引物对在制备检测鸭乙型肝炎病毒的试剂盒中的应用。
3.遗传标记物在制备检测鸭乙型肝炎病毒的试剂盒中的应用，所述遗传标记物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
4.一种检测鸭乙型肝炎病毒的试剂盒，包括权利要求1所述的RPA引物对，以及检测所必须的试剂。
5.根据权利要求4所述的检测鸭乙型肝炎病毒的试剂盒，其特征在于：所述检测所必须的试剂包括：Rehydration Buffer、模板、ddH2O和MgAc。
6.权利要求5所述的试剂盒在检测鸭乙型肝炎病毒中的应用。
7.一种鸭乙型肝炎病毒重组聚合酶等温扩增检测方法，包括以下步骤：
(1)提取待测物的基因组DNA，利用RPA引物对进行重组聚合酶等温扩增，所述RPA引物对包括上游引物和下游引物，其核苷酸序列如如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；
(2)将上述扩增产物进行电泳，观察是否出现239bp条带；若出现239bp条带，则判断为鸭乙型肝炎病毒阳性，若未出现239bp条带，则判断为鸭乙型肝炎病毒阴性。
8.根据权利要求7所述的鸭乙型肝炎病毒重组聚合酶等温扩增检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中，重组聚合酶等温扩增的反应体系包括：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的RPA引物各1.2μL，Rehydration Buffer 29.5μL，模板3μL，ddH2O 12.6μL，MgAc 2.5μL。
9.根据权利要求7所述的鸭乙型肝炎病毒重组聚合酶等温扩增检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中，重组聚合酶等温扩增的条件为：40℃反应25min。
10.根据权利要求7所述的鸭乙型肝炎病毒重组聚合酶等温扩增检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中，进行电泳的具体方式为：取5μL重组聚合酶等温扩增的产物，加入2％琼脂糖凝胶中进行电泳。
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