[发明专利]核酸的合成方法

权利要求书

1.一种核酸的合成方法，其特征在于，所述合成方法包括：

将待合成的核酸按序列顺序拆分成多组片段进行分别合成，得到多组核酸片段，每组所述核酸片段包含2~3个碱基；

采用固相合成的方式将各所述核酸片段按所述序列顺序进行连接，从而得到所述核酸；

多组所述核酸片段采用液相合成的方式合成，所述液相合成通过脱保护基反应、偶联反应及氧化反应三个步骤循环的方式，每次连接一个碱基进行合成。

2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，将所述待合成的核酸按从3’端到5’端的顺序拆分成多组片段进行分别合成。

3.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，将所述待合成的核酸按从5’端到3’端的顺序拆分成多组片段进行分别合成。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的合成方法，其特征在于，所述固相合成通过脱保护基反应、偶联反应、氧化反应以及覆盖自由羟基反应四个步骤循环的方式，每次连接一个所述核酸片段进行合成。

5.根据权利要求4所述的合成方法，其特征在于，采用固相合成的方式将各所述核酸片段按所述序列顺序进行连接，从而得到所述核酸包括：

步骤A，对固相载体表面的保护基进行所述脱保护基反应，露出羟基；

步骤B，将带有所述保护基的所述核酸片段与所述羟基进行所述偶联反应，得到偶联物；

步骤C，对所述偶联物进行所述氧化反应，得到氧化产物；

步骤D，对所述氧化产物进行所述覆盖自由羟基反应，得到连接有所述核酸片段的所述固相载体；

循环执行所述步骤A到所述步骤D，得到所述核酸；

其中，按照所述序列顺序，每次循环连接一个所述核酸片段。

6.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，采用脱保护溶液进行所述脱保护基反应，所述脱保护溶液为1~5 w/v%的二氯乙酸的甲苯溶液、二氯乙酸的二氯甲烷溶液或二氯乙酸的甲醇溶液。

7.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，将所述核酸片段溶于乙腈、二氯甲烷或四氢呋喃中进行所述偶联反应。

8.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，采用 ((E)-N,N-二甲基-N' - (3-硫代-3H-1,2,4-二硫噻唑-5-基)甲脒或氢化黄原素进行所述氧化反应。

9.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，采用乙酸酐和N-甲基咪唑进行所述覆盖自由羟基反应。

10.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，在所述步骤A到所述步骤D的每一步骤后，还包括洗脱纯化步骤。

11.根据权利要求10所述的合成方法，其特征在于，所述洗脱纯化步骤采用乙腈、二氯甲烷或四氢呋喃进行。

12.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，所述保护基为DMTr、MMTr或Tr。

13.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，所述核酸片段与所述羟基的摩尔比为1：1~ 10：1。

14.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，所述核酸为长度为8~30nt的寡核苷酸。

15.根据权利要求14所述的合成方法，其特征在于，所述核酸为15~30nt的反义寡核苷酸。

16.根据权利要求14所述的合成方法，其特征在于，所述核酸为Spinraza。

17.根据权利要求16所述的合成方法，其特征在于，所述Spinraza按照从3’端到5’端的顺序依次拆分成TGG、TGC、TAA、TCA、CTT和TCA六组片段进行分别合成，得到6组核酸片段；采用所述固相合成的方式将6组所述核酸片段按照所述顺序进行连接，得到所述Spinraza。