[发明专利]一种鸡冠花HPLC特征指纹图谱的构建方法及黄酮类成分含量测定

权利要求书

1.一种鸡冠花HPLC特征指纹图谱的构建方法，其特征在于，包含如下步骤：

（1）精密称取鸡冠花药材，制备得到鸡冠花供试品溶液；

（2）将鸡冠花供试品溶液采用高效液相色谱仪分析，得到鸡冠花药材HPLC特征指纹图谱；

所述高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温为28~32℃；以乙腈为流动相A，以体积分数0.18~0.22%的磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱；流速为0.9~1.1ml/min；检测波长为254~365nm；进样量为8~15μl；所述磷酸水溶液含体积分数为0.15~0.25%的三乙胺；

梯度洗脱条件为：0~5min，流动相A的体积分数变化为13~18%，流动相B的体积分数变化为87~82%；5~6min，流动相A的体积分数变化为18~20%，流动相B的体积分数变化为82~80%；6~18min，流动相A的体积分数变化为20%，流动相B的体积分数变化为80%；18~23min，流动相A的体积分数变化为20~38%，流动相B的体积分数变化为80~62%；23~32min，流动相A的体积分数变化为38%，流动相B的体积分数变化为62%；32~38min，流动相A的体积分数变化为38~55%，流动相B的体积分数变化为62~45%；38~43min，流动相A的体积分数变化为55%，流动相B的体积分数变化为45%。

2.根据权利要求1所述的鸡冠花HPLC特征指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述的供试品溶液通过包含如下步骤的方法制备得到：取鸡冠花药材粉末0.08~0.12g，精密加入混合溶液40~60ml，加热55~65分钟，放冷，再称定重量，用混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；所述的混合溶液由乙醇、水和盐酸组成，所述的乙醇、水和盐酸的体积比为45~65：20~30：15~25。

3.一种鸡冠花药材中黄酮类成分的含量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）吸取不同浓度的混合对照品溶液注入高效液相色谱仪，以进样浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线，确定线性回归方程；

（2）将待测鸡冠花样品溶液注入高效液相色谱仪，测定相应峰面积；

（3）通过线性回归方程计算，即得；

所述高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温为28~32℃；以乙腈为流动相A，以体积分数0.18~0.22%的磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱；流速为0.9~1.1ml/min；检测波长为，300~400nm；进样量为8~15μl；所述磷酸水溶液含体积分数为0.15~0.25%的三乙胺；

梯度洗脱条件为：0~15min，流动相A的体积分数为35%，流动相B的体积分数变化为65%；15~20min，流动相A的体积分数变化为35~63%，流动相B的体积分数变化为65~37%；20~28min，流动相A的体积分数为63%，流动相B的体积分数为37%；

所述黄酮类成分为山柰素、异鼠李素和山奈酚-4'-O-甲醚。

4.根据权利要求3所述的鸡冠花药材中黄酮类成分的含量测定方法，其特征在于，所述混合对照品溶液通过如下方法制备得到：加有机溶剂制成每1ml含山柰素15~25μg、异鼠李素1~3μg、山奈酚-4'-O-甲醚1~3μg的混合对照品溶液，即得。

5.根据权利要求3所述的鸡冠花药材中黄酮类成分的含量测定方法，其特征在于，所述的待测鸡冠花样品溶液通过包含如下步骤的方法制备得到：取待测鸡冠花药材粉末0.18~0.22g，精密加入混合溶液40~60ml，加热55~65分钟，放冷，再称定重量，用混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；所述的混合溶液由乙醇、水和盐酸组成，所述的乙醇、水和盐酸的体积比为：45~65：20~30：15~25。