[发明专利]一种采用盐醇法制备透明质酸的方法

权利要求书

1.一种采用盐醇法制备透明质酸的方法，其包括如下步骤：步骤1）发酵，步骤2) 粗提溶解，步骤3) 盐析，步骤4) 乙醇沉淀，步骤5) 离心干燥。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

步骤1）发酵：将兽疫链球菌种子液按照5-10％的接种量接种于含有发酵培养基的发酵罐中培养24h，发酵过程中的温度控制在 35-36℃，搅拌速度为300-400rpm，压力控制在0.1Mpa，pH值控制在7.0-7.1，通过搅拌和通风控制溶氧在15-20%，流加葡萄糖溶液，控制发酵液中残糖含量为15-25g/L；

步骤2) 粗提溶解：往步骤1）所得透明质酸发酵液添加无水乙醇，待有沉淀析出时停止添加，并且停止搅拌，5h后，观察没有大量胶体颗粒沉降时，收集所得沉淀；

步骤3) 盐析：将步骤2）所得沉淀加入纯水，待完全溶解后，加入2%的过滤介质，并用盐酸调节pH值至4.5-4.8，搅拌1小时，再加入2%的氯化钠进行一次过滤，得到晶体A；往晶体A中加入纯水再次溶解，利用氢氧化钠调节pH值至11，然后加入1%的氯化钠进行二次过滤，收集晶体B；将晶体B加入纯水再次溶解，通过陶瓷膜进行过滤，得到滤液C；

步骤4) 乙醇沉淀：将步骤3）所得滤液C中加入浓度为95%、体积为滤液C体积2倍的乙醇，搅拌均匀，静置，弃去上清液，收集沉淀；

步骤5) 离心干燥：将步骤4）所得沉淀脱水、离心、烘干，得透明质酸成品。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，发酵过程中，分别于10、15和20h注入占发酵液1%体积比的H₂O₂。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，发酵过程中，在发酵至6h时，于每升发酵液中以2-6ml/h的流速往发酵罐中流加2%的Na₅P₃O₁₀溶液，直至发酵结束。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，发酵过程中，在发酵至6h时，于每升发酵液中以2-4ml/h的流速往发酵罐中流加5%（v/v）草酸溶液，直至发酵结束。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基的组分为：葡萄糖70g/L，蛋白胨15g/L，牛肉浸膏5g/L，酵母膏5g/L，七水硫酸镁0.3g/L，磷酸氢二钾1.4g/L，磷酸氢二钠1g/L，氯化钾0.4g/L，氯化锌1g/L。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述过滤介质的组分为：活性炭、硅藻土及珍珠岩的质量比为2:1:1。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，发酵过程中，在发酵至6h时，于每升发酵液中以4ml/h的流速往发酵罐中流加2%的Na₅P₃O₁₀溶液，直至发酵结束。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，发酵过程中，在发酵至6h时，于每升发酵液中以3ml/h的流速往发酵罐中流加5%（v/v）草酸溶液，直至发酵结束。

10.按照权利要求1-9所述的方法制备得到的透明质酸。