[发明专利]一种采用盐醇法制备透明质酸的方法

说明书

本发明属于透明质酸制备技术领域，公开了一种采用盐醇法制备透明质酸的方法，其包括如下步骤:步骤1)发酵，步骤2)粗提溶解，步骤3)盐析，步骤4)乙醇沉淀，步骤5)离心干燥。本发明解决了透明质酸生产效率和提取收率低等问题，从而缩短生产周期，降低生产成本，提高产品质量。

技术领域

本发明属于透明质酸生产领域，具体涉及一种采用盐醇法制备透明质酸的方法。

背景技术

透明质酸（Hyaluronic acid 简称 HA），又名玻尿酸，它由葡萄糖醛酸和N-乙酞氨基葡萄糖的双糖单位重复连接形成，是一种酸性粘多糖类高分子化合物。广泛存在于人和动物的结缔组织、眼球玻璃体、细胞间质、关节滑膜液、角膜及细菌壁中。HA以其独特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要的生理功能，是一种具有较高临床价值的生化药物，广泛应用于各类眼科手术；还可用于治疗关节炎和加速伤口愈合；将其用于化妆品中，能起到独特的保护皮肤作用，保持皮肤、头发的水分，滋润皮肤、头发，增加光泽，并能防止皮肤皲裂及皱纹的产生。尤为重要的是，HA具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的天然保湿因子。

随着近几年国内外化妆品行业的迅速发展，对HA的需求与日激增，因此HA在医疗、医疗美容及化妆品行业表现出良好的市场潜力和广阔的发展前景。透明质酸最早是从牛眼的玻璃体中发现的，自此以后，相关研究人员逐渐解析了透明质酸的结构，并对其理化性质展开研究，在此基础上，透明质酸优良的生理生化性能引起了越来越多的关注，更多的学者投入到透明质酸生产制备的研究中。透明质酸生产主要采用动物组织提取和微生物发酵生产两种方式。

动物组织提取透明质酸的生产方法存在以下明显的缺点：第一，生产过程中使用大量酸碱盐化学试剂，易造成环境污染；第二，原料的供应范围相对较窄，存在较大的局限性；第三，产品生产工艺相对繁杂、步骤较多并且程序复杂；第四，产品收率不高一般不超过1％；第五，由于透明质酸与动物组织中其他生物大分子物质尤其是糖胺聚糖结合紧密，获取高聚合度透明质酸难度较大。这些不利因素直接造成动物组织提取透明质酸的成本居高不下，也使得动物源透明质酸产品价格昂贵，限制了其在实际中的广泛应用。

相较于动物提取，发酵法具有不受原料来源限制、工艺简便、易形成生产规模并且无病毒交叉感染的风险，更为重要的是，该方法大大降低了生产成本，使透明质酸的应用范围得到了极大地推广。目前，透明质酸的发酵产率一般在2-3g/L，产率较低，通过优化发酵工艺来进一步提升透明质酸的产量是我们需要解决的技术问题。

虽然我国对HA提取工艺的研究己趋于成熟，但由于原料短缺，生产出的HA多用于医药研究领域，无法满足国内在化妆品及临床医学上的需求。如何采用盐醇法提取HA从而实现大规模生产，降低成本，提高透明质酸的纯度、发酵效率以及提取收率是现有技术需要解决的重要问题。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明提供了一种采用盐醇法制备透明质酸的方法。

本发明是通过如下技术方案来实现的 ：

一种采用盐醇法制备透明质酸的方法，其包括如下步骤：步骤1）发酵，步骤2) 粗提溶解，步骤3) 盐析，步骤4) 乙醇沉淀，步骤5) 离心干燥。

进一步地，所述方法包括如下步骤：

步骤1）发酵：将兽疫链球菌种子液按照5-10％的接种量接种于含有发酵培养基的发酵罐中培养24h，发酵过程中的温度控制在 35-36℃，搅拌速度为300-400rpm，压力控制在0.1Mpa，pH值控制在7.0-7.1，通过搅拌和通风控制溶氧在15-20%，流加葡萄糖溶液，控制发酵液中残糖含量为15-25g/L；

步骤2) 粗提溶解：往步骤1）所得透明质酸发酵液添加无水乙醇，待有沉淀析出时停止添加，并且停止搅拌，5h后，观察没有大量胶体颗粒沉降时，收集所得沉淀；