[发明专利]一种利用角蛋白酶提取DNA的方法

说明书

本发明公开了一种利用角蛋白酶提取DNA的方法，该发明通过分解角蛋白获得DNA，指纹中含有皮肤角质层细胞脱落的物质，角质层细胞是一些角化死亡的细胞，含有少量尚未完全降解的基因组DNA和大量角蛋白，与角质层细胞类似，指甲、毛发也含有少量尚未完全降解的基因组DNA和大量角蛋白，而角蛋白分子内部含有丰富的二硫键，使得肽链内部和肽链之间发生交联，形成立体网状结构，使角蛋白难以溶解以及分解，加入角蛋白酶利用酶的专一性使得样品中的角蛋白被角蛋白酶分解为可溶性的多肽，从而释放样品中的DNA,并经过一系列裂解、结合、漂洗、洗脱等DNA提取步骤，实现DNA提取的目的，提取得到的DNA纯度高，方法便捷，具有很好的推广前景。

技术领域

本发明属于提取DNA技术领域，具体涉及一种利用角蛋白酶提取DNA的方法。

背景技术

嫌疑人在犯罪现场残留的生物物证中，指纹、毛发、指甲等占有非常大的比例，而案件侦查人员想要从这些物证中获取嫌疑人遗传信息，就必须解决指纹、毛发、指甲等的DNA提取问题，指纹中含有皮肤角质层细胞脱落的物质，角质层细胞是一些角化死亡的细胞，含有少量尚未完全降解的基因组DNA和大量角蛋白，与角质层细胞类似，指甲、毛发也含有少量尚未完全降解的基因组DNA和大量角蛋白，如何消化角蛋白，释放其中的微量DNA，是从指纹、毛发、指甲中成功提取DNA的关键；

现阶段常用的DNA提取方法为有机法，有机法利用DNA易溶于水，不溶于有机溶液的特性，进行提取使用有机溶剂将样品与纯水混合，样品中蛋白质分子与水进行水合作用，在表面形成一层水化层，使蛋白质分子进入水溶液中形成稳定胶体溶液，通过加入有机溶剂进行离心提取DNA,其提取DNA特点为双链，纯度高，但在提取DNA的过程中加入一定量的有毒有机试剂，进行DNA提取时会挥发，对人体造成伤害，同时造成环境污染，且需要平凡的更换DNA离心管，导致在DNA的提取过程中DNA易受到污染，影响检测效果，同时多次更换DNA离心管，易造成容器的编码混乱，无法准确检测DNA序列；

中国发明专利CN102382821A公开了一种提取DNA的方法，该发明通过将样品经无水乙醇和蒸馏水洗涤干燥后，在加有SDS和蛋白酶K的PCR缓冲液中消化后，加入RNA酶去除RNA，然后在高盐环境下加入CTAB结合蛋白质，最终经过氯仿异戊醇抽提，异丙醇沉淀，使用乙醇溶液进行洗涤，得到DNA样品，该发明进行DNA抽取使得样品内的DNA释放充分，抽提效果好，但该发明在提取DNA的过程中，使用了一定量的有毒有机溶剂，易造成操作人员健康损害和对环境造成污染，加入过多的有机试剂，在DNA链进行放大扩增时会造成一定影响，影响后续对DNA序列的测定。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用角蛋白酶提取DNA的方法，先进行取样，再对样品进行处理，将处理后的样品加入离心管中，加入角蛋白酶和裂解液,角蛋白酶是一种能够专一降解天然角蛋白的酶，能将不溶解于水的角蛋白分解为可溶性的多肽，而指纹含有皮肤角质层细胞脱落的物质，角质层细胞是一些角化死亡的细胞，含有少量尚未完全降解的基因组DNA和大量角蛋白，头发和指甲含有少量尚未完全降解的基因组DNA和大量角蛋白，通过角蛋白酶使得角蛋白分解，裂解液从样品中抽取的可溶性蛋白，通过离心使得蛋白质脱离，加入结合液通过硅胶膜离心柱进行离心得到DNA，加入漂洗液使得DNA沉淀出来，多次离心使得DNA附着在硅胶膜上，使用脱洗液将DNA从硅胶膜上分理出来，获得DNA溶液；该方法未使用大量的有毒有溶剂，在提取过程中不会危害操作人员的人生安全且不会对环境造成污染，未使用大量的有毒有溶剂也不会对后续DNA序列测定造成影响，更换DNA装取容器次数较少不会对DNA造成污染，操作简便，提取DNA纯度高。

本发明要解决的技术问题：

1、常用的提取DNA的方法为有机法和Chelex100法，有机法是经典DNA提取方法，其提取DNA特点为双链，纯度高，但在提取DNA的过程中加入一定量的有毒有机试剂，进行DNA提取时会挥发，对人体造成伤害，同时造成环境污染，在提取DNA的过程中需要多次更换DNA装取容器，易对DNA造成污染，导致影响后续DNA序列测定结果；