[发明专利]用于检测宫颈癌相关基因甲基化的检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明涉及一种用于检测宫颈癌相关基因甲基化的检测试剂盒及其使用方法，检测试剂盒包括用于检测FAM19A4基因甲基化的第一引物对和第一探针、用于检测EPB41L3基因甲基化的第二引物对和第二探针以及用于检测PAX1基因甲基化的第三引物对和第三探针。本发明的检测试剂盒从众多宫颈癌相关基因中筛选了三个与宫颈癌高度特异性相关的基因FAM19A4、EPB41L3和PAX1，并在此三个基因的启动子区各设计筛选得到一组特异性强且兼容性好的甲基化检测引物对和探针。通过使用上述三组引物对和探针去扩增待测DNA样本，然后根据荧光定量PCR扩增结果的相对荧光值即可确定待测DNA样本的基因甲基化检测结果。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，特别是涉及一种用于检测宫颈癌相关基因甲基化的检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，患病的高峰年龄为40～60岁，近年来宫颈癌的发病年龄呈年轻化趋势。研究表明，宫颈癌的诱发，与人类乳头瘤病毒(HPV)的病原体有关。高危型HPV(hrHPV)感染后，宫颈癌的发生需要经历多个步骤：从hrHPV持续感染，到癌前病变(CIN1期→CIN2期→CIN3期)，最后才发展成浸润癌。宫颈癌的发生发展，尤其是癌前病变到浸润癌，绝大多数病人需要经历很长一段时间。hrHPV感染后经3～5年可以进展为高级别病变的CIN2期和CIN3期，而进一步发展为浸润癌则需20～30年，癌前病变及宫颈癌早期可以没有任何症状。癌前病变时间很长，如果在这个阶段通过筛查早发现，尽早采取有效的干预治疗措施，则可以较好的避免癌前病变进一步发展成癌症，大大降低宫颈癌的发生率和死亡率，从而达到预防宫颈癌的目的。

目前宫颈癌的筛查方法主要有两种：宫颈细胞学检查和HPV检查，宫颈细胞学检查主要通过对宫颈脱落细胞进行染色，观察细胞形态变化进而判断宫颈细胞有没有癌变情况；HPV检查通过核酸检测等方法，检测宫颈有没有感染HPV病毒，属于病因检查。细胞学检查特异度较高，但灵敏度较低，且细胞学的结果判断需要专业的病理医生在显微镜下进行判读，结果受主观影响，容易出现漏诊、误诊现象，而且由于病理医生的短缺，低资源地区难以普及。HPV检测的灵敏度高，但特异性较差，其假阳性率比较高，大部分HPV为一过性感染，不会发展为宫颈癌前病变或宫颈癌，HPV阳性结果给妇女造成了不必要的恐慌，也浪费了医疗资源。因此，亟需一种可以识别真正具有宫颈癌高风险的生物学标志物，实现对宫颈癌及癌前病变的早期、灵敏和稳定的诊断，以便进行及时、有效的治疗，降低医疗成本，节约社会资源。

发明内容

基于此，有必要提供一种灵敏度高、特异性强的用于检测宫颈癌相关基因甲基化的检测试剂盒。

一种用于检测宫颈癌相关基因甲基化的检测试剂盒，包括用于检测FAM19A4基因甲基化的第一引物对和第一探针、用于检测EPB41L3基因甲基化的第二引物对和第二探针以及用于检测PAX1基因甲基化的第三引物对和第三探针；其中，所述第一引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述第一探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述第二引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，所述第二探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，所述第三引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示，所述第三探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。