[发明专利]一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的七肽及其应用

权利要求书

1.一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的七肽，其特征在于所述七肽的氨基酸序列为Cys-Gly-Lys-Lys-Phe-Val-Arg，所述七肽的缩写为CGKKFVR；

所述七肽可以从黑茶黑毛尖茶中分离得到；

所述寡肽的制备步骤如下：

(1)茶蛋白提取：从黑毛尖茶叶中提取黑毛尖茶粗蛋白；

(2)粗蛋白的酶解：将步骤(1)制得的黑毛尖茶粗蛋白酶解，制得黑毛尖茶胰蛋白酶酶解组分，冻干备用；

(3)“酶-抑制肽”复合物的制备：取所述黑毛尖茶胰蛋白酶酶解组分配成1-5mg/mL样品溶液，将α-葡萄糖苷酶溶解在10mMpH6.8磷酸盐缓冲液中配成10U/mL的α-葡萄糖苷酶溶液，再取50-300μL所述样品溶液与100-500μL所述α-葡萄糖苷酶溶液混合，于37℃下，摇床培养10-60min，使酶与抑制剂样品充分结合；

(4)未与酶结合成分的去除：培养结束后，把步骤(3)制得的混合物加入截留分子量为30kDa的超滤离心管中，并于常温下，10000rpm/min离心25min，去除样品中未与酶结合的成分，用200μL磷酸缓冲洗截留后的滤液3次，并于常温下，5000rpm/min离心5min；

(5)抑制肽的释放、分离与鉴定：离心后往上层的“酶-抑制肽”复合物层液体中加入100-400μL50％乙腈水溶液，混合均匀，静置10min之后，在常温下以10000rpm/min离心10分钟，重复2次，合并滤出液，过0.22μm超滤膜，制得黑毛尖茶超滤液，进行高效液相谱分离，收集合适的峰，即获得所述具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的七肽。

2.一种药物组合物，其特征在于所述药物组合物含有权利要求1所述的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的七肽。

3.根据权利要求1所述的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的七肽，其特征在于所述七肽可以使用固相合成仪合成制得。

4.根据权利要求1所述的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的七肽，其特征在于所述七肽在浓度为4mg/mL时，对α-葡萄糖苷酶的体外抑制率为93.5％。

5.根据权利要求1所述的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的七肽，其特征在于所述七肽在浓度为2mg/mL时，对α-葡萄糖苷酶的体外抑制率为78.4％。

6.根据权利要求1所述的具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的七肽，其特征在于所述七肽在浓度为0.25mg/mL时，对α-葡萄糖苷酶的体外抑制率为54.4％。