[发明专利]一种缺氧诱导因子重组表达质粒转染树突状细胞的方法有效
| 申请号： | 201910898161.X | 申请日： | 2019-09-23 |
| 公开（公告）号： | CN111748581B | 公开（公告）日： | 2022-03-04 |
| 发明（设计）人： | 邓武 | 申请（专利权）人： | 陕西众惠生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 刘潇 |
| 地址： | 712000 陕西省咸阳市*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 缺氧 诱导 因子 重组 表达 质粒 转染 树突 细胞 方法 | ||
1.一种缺氧诱导因子重组表达质粒转染树突状细胞的方法，其特征在于，包括：将树突状细胞、液体培养基、缺氧诱导因子重组表达质粒和脂质体溶液混合后，静置，得到转染体系混合液；将所述转染体系混合液和液体培养基、细胞因子混合，得到混合物，将所述混合物进行培养，得到转染细胞；
所述树突状细胞的数量与液体培养基的体积比为(0.8～1.2)×106个:1mL；
所述缺氧诱导因子重组表达质粒为pcDNA3-Hif-1αP402A/P564A质粒；所述pcDNA3-Hif-1αP402A/P564A质粒的质量与液体培养基的体积比为(500ng～2μg):1mL；
所述脂质体溶液与液体培养基的体积比为(2～3μL):1mL；
所述脂质体包括Lipofectamine2000或TransLipid HL。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液体培养基为无血清培养基。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞因子包括粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在混合物中的质量浓度为20～50ng/mL。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述白细胞介素4在混合物中的质量浓度为10～25ng/mL。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合物进行 培养采用二氧化碳细胞孵箱进行培养。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合物进行 培养的时间为6d～8d。
8.根据权利要求1或7所述的方法，其特征在于，所述混合物进行 培养至第7d时，还包括加入脂多糖，所述脂多糖在混合物中的浓度为100～200ng/mL。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述静置的时间为15～35min。
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