[发明专利]一种通过基因编辑技术提高番茄中番茄红素含量的方法在审
| 申请号： | 201910899703.5 | 申请日： | 2019-09-23 |
| 公开（公告）号： | CN110499319A | 公开（公告）日： | 2019-11-26 |
| 发明（设计）人： | 汪启明;周池;饶力群;陈苗;朱建华 | 申请（专利权）人： | 湖南农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C12N15/82;A01H5/08;A01H6/82 |
| 代理公司： | 43001 长沙永星专利商标事务所(普通合伙) | 代理人： | 周咏;林毓俊<国际申请>=<国际公布>= |
| 地址： | 410128 *** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 番茄材料 番茄 番茄红素环化酶 番茄红素 靶序列 表达盒 构建 番茄红素环化酶基因 合成相关基因 外源载体序列 重组质粒转化 农杆菌侵染 表达载体 多个基因 重组质粒 基因 转基因 突变 组装 合成 遗传 筛选 | ||
1.一种通过基因编辑技术提高番茄中番茄红素含量的方法，包括以下步骤:
1)分别构建Lcyb1、Lcyb2、CycB和LcyE基因的靶序列T1～T4，然后通过靶序列分别构建其对应的T1sgRNA～T4sgRNA表达盒；
2)将步骤1)中的T1sgRNA～T4sgRNA表达盒与crispr/cas9表达载体进行组装，得到重组质粒；
3)利用农杆菌侵染法将步骤2)中的重组质粒转化到番茄中，得到番茄新材料，因为新番茄材料中与番茄红素环化酶合成相关基因会存在一个或多个基因的突变，从而抑制番茄红素环化酶的合成，使得新番茄材料的番茄红素含量提高；
其中：T1～T4的核苷酸序列如序列1～4所示。
2.根据权利要求1所述的通过基因编辑技术提高番茄中番茄红素含量的方法，其特征在于，所述步骤1)中，T1sgRNA表达盒中含有T1sgRNA序列如序列5所示；T2sgRNA表达盒中含有T2sgRNA序列如序列6所示；T3sgRNA表达盒中含有T3sgRNA序列如序列7所示；T4sgRNA表达盒中含有T4sgRNA序列如序列8所示。
3.根据权利要求1所述的通过基因编辑技术提高番茄中番茄红素含量的方法，其特征在于，所述步骤2)中所述的重组质粒的核苷酸序列如序列9所示。
4.根据权利要求1中所述的靶序列T1～T4在制备高番茄红素的番茄材料中的应用。
5.根据权利要求1或2所述的T1sgRNA～T4sgRNA序列在制备高番茄红素的番茄材料中的应用。
6.根据权利要求1或3所述的重组载体在制备高番茄红素的番茄材料中的应用。
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