[发明专利]免疫健全的滑膜肉瘤异种移植小鼠模型的构建方法及应用

权利要求书

1.一种免疫健全的滑膜肉瘤异种移植小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

步骤一、P0代的培养：先采集滑膜肉瘤患者肿瘤组织块，再在无菌条件下将新鲜的患者肿瘤组织块异种移植进免疫缺陷小鼠体内，所述异种移植包括选用年龄在2~6周的免疫缺陷小鼠，小鼠性别与患者性别保持一致，将采集到的新鲜的患者肿瘤组织块浸泡在含胎牛血清的无菌孵育液中，小鼠麻醉后固定，将患者肿瘤组织块植入小鼠体内，缝合切口，养育小鼠使得其肿瘤生长；所述异种移植包括皮下移植或原位移植；将P0代免疫缺陷小鼠体内生长的滑膜肉瘤肿瘤组织块接种至另一免疫缺陷小鼠体内，形成P1代荷瘤免疫缺陷小鼠；将P1代荷瘤免疫缺陷小鼠体内生长的滑膜肉瘤肿瘤组织块接种至另一免疫缺陷小鼠体内，形成P2代荷瘤免疫缺陷小鼠；以此类推；

步骤二、免疫正常的小鼠经环孢素预处理：在免疫正常的小鼠体内注入含环孢素的注射液或让免疫正常的小鼠食用含环孢素的饮食；

步骤一和步骤二任意先后完成，但均需要在步骤三之前完成；

步骤三、Px代的培养：Px代中的x为大于等于1的自然数，取P0代至Px-1代中任意一代的荷瘤免疫缺陷小鼠体内生长的滑膜肉瘤肿瘤组织块接种至步骤二中制备的已经由环孢素预处理的小鼠体内，形成Px代荷瘤小鼠；将Px代荷瘤小鼠体内生长的滑膜肉瘤肿瘤组织块接种至另一只步骤二中制备的已经由环孢素预处理的小鼠体内，形成Px+1代荷瘤小鼠；将Px+1代荷瘤小鼠体内生长的滑膜肉瘤肿瘤组织块接种至另一只步骤二中制备的已经由环孢素预处理的小鼠体内，形成Px+2代荷瘤小鼠；以此类推；

步骤四、Py代的培养：Py代中的y为大于等于x+1的自然数，取步骤三中Px代至Py-1代中任意一代的荷瘤小鼠体内生长的滑膜肉瘤肿瘤组织块接种至免疫正常的小鼠体内，养育该免疫正常的小鼠，至其体内生长出滑膜肉瘤肿瘤组织，即完成所述Py代的培养。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述原位移植是指在关节囊中植入滑膜肉瘤组织块。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述关节囊为膝关节囊。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述滑膜肉瘤患者肿瘤组织块的单边长度小于等于3mm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，皮下移植或原位移植时小鼠的体重为8~20g，所述无菌孵育液中包含抗生素和DMEM培养基或RPMI-1640培养基，所述抗生素包含青霉素和链霉素。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫缺陷小鼠为NOD/SCID 小鼠，所述免疫正常小鼠为BALB/c小鼠。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括采用小动物活体成像仪观察小鼠体内滑膜肉瘤大小。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将部分P0代肿瘤瘤体程序降温并保存在液氮中，以及包括将部分P1代、P2代至Py代肿瘤瘤体程序降温并保存在液氮中。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤二中对免疫正常的小鼠经环孢素预处理的步骤包括：镊子夹取酒精棉球轻轻擦拭皮肤，注射器抽取配置好的浓度为1~2wt%的环孢素溶液，以每只小鼠0.02~0.08ml的剂量给药；每日一次，连续注射3~10日。

10.一种如权利要求1~9中任意一项所述方法得到的小鼠模型在筛选预防或治疗滑膜肉瘤药物中的应用。