[发明专利]免疫健全的滑膜肉瘤异种移植小鼠模型的构建方法及应用

说明书

本发明提供一种免疫健全的滑膜肉瘤异种移植小鼠模型的构建方法，包括P0代的培养：先采集新鲜的滑膜肉瘤患者肿瘤组织块，再在无菌条件下将其移植进免疫缺陷小鼠体内；免疫正常的小鼠经环孢素预处理；Px代的培养：取P0代至Px‑1代中任意一代的小鼠体内生长的肿瘤组织块接种至上述已经由环孢素预处理的小鼠体内，形成Px代小鼠；Py代的培养：取上述Px代至Py‑1代中任意一代小鼠体内生长的滑膜肉瘤肿瘤组织块接种至免疫正常的小鼠体内，至其体内生长出肿瘤组织，即完成所述Py代的培养。本发明改进了传统PDX模型无免疫系统的问题，为肿瘤免疫疗法的研究提供体内模型，拓宽了PDX模型的应用范围。

技术领域

本发明涉及肿瘤移植小鼠模型的建立领域，具体涉及一种免疫健全的滑膜肉瘤异种移植小鼠模型的构建方法及应用。

背景技术

滑膜肉瘤(Synovial sarcoma，SS)是一种高度恶性的软组织肉瘤，约占软组织肉瘤的7-10％[1]。由于SS组织起源复杂，没有明确的危险因素，病理形态多变，良恶性分界困难，因此，其诊断、鉴别诊断和分类就成为临床面临的难题。SS常见于20-30岁男性(男/女约为1.2：1)，主要好发于四肢大关节附近，但全身几乎任何部位都可发生，且SS几乎不发生在关节内，也和正常滑膜组织没有关系。原发SS约80％发生在手足部位，20％左右发生在非手足部位如肋骨、心包、肺脏和腹壁。SS绝大多数SS转移到肺，腹腔内转移少见。既往研究认为，大范围切除瘤体及周围可切除的组织是治疗SS的首选方法，但其复发率高，故综合治疗成为改善SS预后的重要手段。这为患者及其家庭带来极大的精神伤害，也为社会乃至国家都带来沉重的经济负担，带来更大的社会问题。因为滑膜肉瘤组织异质性的存在，既往基于滑膜肉瘤细胞系的基础研究结果很难在临床滑膜肉瘤患者体内重现，较大程度导致临床滑膜肉瘤诊治水平的滞后。

因此，利用与患者原发肿瘤同质性更好的患者来源的人源性异种移植模型(patient-derived xenograft，PDX)模型意义深远，其可以深入探讨滑膜肉瘤发病机制，基于PDX研发的成果可在患者体内得到较好的重复，同时可以大量扩增临床患者体内有限的滑膜肉瘤样本，使用异种移植小鼠代替临床患者进行不同组合药物筛选，从而选择最合适的药物，大大提高有效性并降低药物副作用。

PDX模型在近几年的发展和应用展现了其在肿瘤研究和临床应用方面较细胞系建立的肿瘤模型的优越性，但PDX模型一般都需要免疫缺陷小鼠作为肿瘤载体进行相关研究。小鼠的免疫缺陷使得PDX肿瘤模型得以建立和应用，却也限制了其应用，因为诸多免疫相关的治疗及研究如免疫检查点抑制剂需要小鼠的免疫系统相对正常才可进行，所以小鼠完整的免疫系统是目前PDX模型所急需解决的问题。

事实上，最早将患者的肿瘤成功移植于小鼠体内是借助于免疫正常鼠来实现的，即通过特定的方式方法，一定程度上抑制了免疫正常鼠的免疫功能，从而成功将人类肿瘤种植于鼠体内，并非是免疫缺陷鼠。如研究者使用致死剂量的X射线照射免疫正常的大鼠以破坏其免疫系统，以此成功的建立肿瘤模型。这种方法使整个大鼠的机体组织受损，因而使整个大鼠的各项生理机能受损，加之此方法下小鼠死亡率很高，其普遍应用价值很低。不过随着肿瘤传代，肿瘤的有丝分裂象及血管化似乎在加强，提示着肿瘤对于小鼠体内环境缓慢的适应与改变。之后长期大剂量的肾上腺皮质激素可的松也应用于抑制正常鼠免疫力，从而创造适宜肿瘤移植的环境。以上两种方法建立的肿瘤传代受到极大限制，很难继续在免疫正常的鼠中继续传代下去，进一步限制了其应用。