[发明专利]NAT基因作为筛选标记在衣藻遗传转化中的应用

说明书

本发明公开了NAT基因作为筛选标记在衣藻遗传转化中的应用。本发明首先公开了NAT基因作为筛选标记在衣藻遗传转化和/或制备衣藻目的基因表达株中和/或制备转基因衣藻藻株的应用。本发明进一步公开了序列表中的序列1所示的DNA分子。本发明将诺尔丝菌素N‑乙酰转移酶基因作为衣藻遗传转化和/或制备衣藻目的基因表达株和/或制备转基因衣藻藻株的筛选标记，简单方便、可重复性好，能很有效地应用于衣藻基因改造领域，进一步推动衣藻作为“生物工厂”更经济高效地生产出重组蛋白用于医疗、保健及水产养殖疾病防治中。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及NAT基因作为筛选标记在衣藻遗传转化中的应用

背景技术

衣藻是一种模式生物，它的一项热点研究是被用于开发成为一种新兴的具有较高商业价值的重组蛋白生产工厂。如在衣藻中表达水产生物抗病蛋白，该藻类被水产生物食用后能减少水产养殖业疾病发生，提高经济效益。因此，在衣藻中重组蛋白的高水平表达和多种重组蛋白同时表达是当前热点。然而，衣藻目的基因表达株的筛选很大程度上受目前屈指可数的抗性标记所限制，比如当前常用的只有巴龙霉素paromomycin、潮霉素hygromycin、博来霉素zeocin等少数抗性标记。

因此，开发用于衣藻研究的新抗性标记对于推动衣藻成为蛋白生产工厂至关重要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为获得适用于衣藻遗传转化筛选的抗性标记。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了诺尔丝菌素-N-乙酰转移酶基因(NAT基因)作为筛选标记在衣藻遗传转化中和/或制备衣藻目的基因表达株中和/或制备转基因衣藻藻株中的应用。

上述应用中，所述诺尔丝菌素-N-乙酰转移酶基因为如下1)-5)中任一种的DNA分子：

1)序列表中的序列1所示的DNA分子；

2)编码区为序列表中的序列1所示的DNA分子；

3)序列表中的序列2所示的DNA分子；

4)编码区为序列表中的序列2所示的DNA分子；

5)在严格条件下与1)或2)或3)或4)限定的DNA分子杂交，且编码诺尔丝菌素-N-乙酰转移酶的DNA分子。

其中，所述序列1为序列2所示的序列经过密码子优化后得到的序列，序列1和序列2所述的DNA分子均能表达出氨基酸序列如序列表中序列3的诺尔丝菌素-N-乙酰转移酶。

根据密码子的简并性，编码出诺尔丝菌素-N-乙酰转移酶的DNA分子有多种，本领域技术人员根据序列1或序列2所示的诺尔丝菌素-N-乙酰转移酶基因序列可以设计出多种可编码诺尔丝菌素-N-乙酰转移酶的序列，其均可以作为筛选标记，均属于本发明的保护范围。

与上述诺尔丝菌素-N-乙酰转移酶基因相关的生物材料在制备衣藻目的基因表达株中和/或制备转基因衣藻藻株的应用也在本发明的保护范围之内。

上述应用中，所述生物材料为下述任一种：

C1)含有上述诺尔丝菌素-N-乙酰转移酶基因的表达盒；

C2)含有上述诺尔丝菌素-N-乙酰转移酶基因的重组载体、或含有C1)所述表达盒的重组载体；

C3)含有上述诺尔丝菌素-N-乙酰转移酶基因的重组微生物、或含有C1)所述表达盒的重组微生物、或含有C2)所述重组载体的重组微生物；

C4)含有上述诺尔丝菌素-N-乙酰转移酶基因的转基因衣藻细胞系、或含有C1)所述表达盒的转基因衣藻细胞系、或含有C2)所述重组载体的转基因衣藻细胞系。