[发明专利]一种化学发光定量检测粪便钙卫蛋白及其检测方法和其在肠道健康检测的用途

说明书

本发明公开了一种化学发光定量检测粪便钙卫蛋白及其检测方法和其在肠道健康检测的用途，检测试剂，包括：免疫复合体，抗体检测体系；免疫复合体包括：钙卫蛋白校准品，钙卫蛋白质控品，由标记后的第一特定抗体、标记后的第二特定抗体和待测样本复合后形成的被标记的钙卫蛋白复合物抗体；第一特定抗体，第二特定抗体与钙卫蛋白的结合方式为：一种抗体与钙卫蛋白S100A8肽链氨基酸序列中的氨基酸表位特异性结合，另一种抗体与钙卫蛋白S100A9肽链氨基酸序列中的氨基酸表位特异性结合；本发明能够准确、定量检测人粪便样本中钙卫蛋白含量，具有灵敏度高、稳定性好的优点，对肠道健康检测具有较高的临床辅助价值。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别是一种化学发光定量检测粪便钙卫蛋白及其检测方法和其在肠道健康检测的用途。

背景技术

炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)为累及回肠、直肠、结肠的一种慢性、特发性肠道炎症性疾病。临床表现腹泻、腹痛，甚至可有血便。本病包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)和克罗恩病(Crohn’s disease，CD)。溃疡性结肠炎是结肠黏膜层和黏膜下层连续性炎症，疾病通常先累及直肠，逐渐向全结肠蔓延。克罗恩病可累及全消化道，为非连续性全层炎症，最常累及部位为末端回肠、结肠和肛周。IBD病因和发病机制尚未完全明确，已知肠道黏膜免疫系统异常反应所导致的炎症反应在IBD发病中起重要作用，认为是由多因素相互作用所致，主要包括环境、遗传、感染和免疫因素。

IBD具有慢性和反复发作的临床特点，因此在治疗过程中，需要反复对疾病进行疗效的评估，以判断治疗效果或及时调整治疗方案；对于缓解期的患者，也需要长期密切随访复查，以监测其是否复发。目前判断IBD活动度最准确的方法是进行结肠镜联合活组织检查。但结肠镜及组织活检存在以下问题：属于侵入性检查，患者存在痛苦的体验；检查时间相对较长，整个过程需要病人的积极配合；临床工作中，部分患者难以接受，依从性差；对于儿童而言，更加不能耐受肠镜带来的痛苦，很难配合其检查；值得警惕的是，对重症或爆发型患者，行结肠镜检查有诱发中毒性巨结肠的风险，针对这类病人，反复多次行结肠镜检查属于禁忌；此外，当合并狭窄、镜身不能通过时，结肠镜无法评价狭窄以上肠腔的炎症情况。综上所述，结肠镜及组织活检不能完全满足临床的需要。因此，需要一种能有效反应肠道粘膜炎症的、简便、无创的检查指标。

炎症性肠病常用实验室检查方法主要有血沉、C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)和白细胞总数(white blood cells,WBC)、血小板(platelet，PLT)、血红蛋白、白蛋白、血沉等，但这些指标的敏感性和特异性尚不理想，且易受到全身其他炎症的影响，临床应用价值有限。粪便铟标记的白细胞排泄率是反映IBD疾病活动度的金标准，但它取样费时、操作复杂，且需要注入核素，对患者健康造成一定的影响，限制了其应用。

市场需要一种能够无创、简便、特异性强、敏感性高、避免全身炎症影响的肠道健康检测方法。

用粪便钙卫蛋白辅助检测炎症性肠病，已经被写入国内外指南的推荐。例如我国炎症性肠病诊断与治疗的共识意见指出“有条件的单位可做粪便钙卫蛋白等检查作为辅助检查指标”，2010年世界胃肠病学组织关于炎症性肠病诊断和治疗的实践指南也将粪便钙卫蛋白作为推荐的辅助检查之一。粪便钙卫蛋白在炎症性肠病诊断中发现最早、研究最广泛，最具有代表性。

钙卫蛋白属于S100蛋白大家族，由中性粒细胞、巨噬细胞等骨髓源性细胞分泌，是中性粒细胞和活化的巨噬细胞质中重要的蛋白质，约占中性粒细胞胞质蛋白质的60％左右。在炎症、肿瘤、感染、免疫调节、细胞凋亡、衰老等重要的病理和生理过程中均发挥重要作用。钙卫蛋白在人体内的细胞、组织以及体液中分布广泛，能够在血浆、粪便、尿液、唾液、滑膜液、脑脊液以及结肠粘膜组织活检中被检测到。钙卫蛋白作为一种肠炎症标志物，可以清楚的区分器质性炎症性疾病IBD和功能性疾病IBS，可以作为一种评价炎症性肠病的活动性指标，评估炎症性肠病黏膜，评价药物治疗作用，治愈和预测疾病复发情况。