[发明专利]一种鱿鱼墨海洋微生物培养基的制备方法

说明书

本发明提出了一种鱿鱼墨海洋微生物培养基的制备方法，包括以下步骤为：S1.配置缺少氮源、碳源的不完全培养基；S2.培养基的制备：将鱿鱼墨与灭菌人工海水混合，调节pH，消毒，将鱿鱼墨‑海水混合液与不完全培养基、灭菌改性硅藻土混匀，得到鱿鱼墨海洋微生物培养基。本发明工艺简单合理、易操作，以葛仙米糖蛋白和鱿鱼墨作为培养基补充氮源和碳源，制得的鱿鱼墨培养基具筛选抗氧化性良好的适应低浓度营养状态的鱿鱼体内部海洋微生物，本培养基专一性较强，适合与鱿鱼等相似的头足类海洋动物的体内微生物的筛选。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种鱿鱼墨海洋微生物培养基的制备方法。

背景技术

鱿鱼墨约占鱿鱼体重的1.3%，是鱿鱼加工的主要副产物之一（张井.北太平洋鱿鱼内脏酶解液中重金属镉的脱除研究[D].中国海洋大学硕士学位论文,2009.），黑色素是目前所知的唯一保护生物体免受辐射伤害的天然内源生物聚合体，具有抗氧化、促进免疫功能、促进骨髓造血和防止衰老等功能。头足类海洋生物体内含有类似的墨汁，鱿鱼墨主要成分为黑色素和蛋白多糖复合体，其内的微生物与宿主未共生关系，可为微生物提供碳源和氮源，海洋微生物的筛选一直是微生物实验工作者的一个难点（衣尧.海洋微生物抗肿瘤活性产物的筛选、菌种鉴定及产物的初步研究[D].上海海洋大学硕士学位论文,2013.），海洋的环境具有高盐度、寡营养等特点，而头足类海洋生物的内生微生物的相关研究领域较为薄弱，利用相似的培养条件，模拟共生状态，可使头足类海洋生物的内生微生物具备与环境相适应的次生代谢产物，也同样具备与真黑色素相似的性质，且可扩大规模，降低成本。

发明内容

本发明提供一种鱿鱼墨海洋微生物培养基及其制备方法，其目的在于，提供一种鱿鱼墨海洋微生物培养基，以葛仙米糖蛋白和鱿鱼墨作为培养基补充氮源和碳源，制得的鱿鱼墨培养基具筛选抗氧化性良好的适应低浓度营养状态的鱿鱼体内部海洋微生物，本培养基专一性较强，适合与鱿鱼等相似的头足类海洋动物的体内微生物的筛选。

本发明提供一种鱿鱼墨海洋微生物培养基的制备方法，包括以下步骤为：

S1. 配置缺少氮源、碳源的不完全培养基：加入MgSO₄，使其质量分数为0.01-0.04%，加入KH₂PO₄，使其质量分数为0.11-0.14%，加入牛肉膏，使其质量分数0.05%-0.1%，加入人工海水调配，使其质量分数为3-3.5%，用0.1mol/L的NaOH溶液调节混合液pH至7.0-7.4，高温灭菌得到灭菌完成的不完全培养基；

S2. 培养基的制备：将鱿鱼墨与灭菌人工海水按照质量体积比1:60-90混合，调节pH至7.0-7.4，消毒，于超净工作台中将鱿鱼墨-海水混合液与步骤S1得到的不完全培养基、灭菌改性硅藻土混匀，得到鱿鱼墨海洋微生物培养基；

所述改性硅藻土为葛仙米糖蛋白/硅藻土复合材料。

作为本发明进一步的改进，所述改性硅藻土的制备方法为将葛仙米糖蛋白加入0.5wt%的木醋液溶液中溶解，搅拌后加入硅藻土，继续搅拌混合均匀，40℃烘干研细，得到改性硅藻土。

作为本发明进一步的改进，所述葛仙米糖蛋白与木醋液的质量体积比为1：20-50，所述葛仙米糖蛋白与硅藻土的质量比为1:5-10。

作为本发明进一步的改进，所述搅拌混合为200-500r/min搅拌1h。

作为本发明进一步的改进，所述葛仙米糖蛋白的制备方法为将葛仙米干粉加入水中沸水提取1-2h，离心，浓缩至相对密度为2-2.5，加入75%的乙醇沉淀，得到黏性蛋白产物后加入混合有机溶剂，搅拌后静置24h，收集上清液，加入75%的乙醇沉淀，离心，收集沉淀，得到葛仙米糖蛋白。