[发明专利]一种控制甘蓝型油菜种子种皮颜色的基因、甘蓝型油菜黄籽突变体材料的获取方法及其应用在审
| 申请号： | 201910912426.7 | 申请日： | 2019-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN110511944A | 公开（公告）日： | 2019-11-29 |
| 发明（设计）人： | 范楚川;翟云孤;周永明;蔡胜利;杨阳 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C12N15/82;A01H5/10;A01H6/20 |
| 代理公司： | 11401 北京金智普华知识产权代理有限公司 | 代理人： | 杨采良<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 430000 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 突变体 纯合突变体 原花色素 拷贝 种皮 基因 甘蓝型油菜黄籽 甘蓝型油菜种子 分子育种技术 品质分析 品质改良 同源基因 显微观察 遗传转化 应用潜力 油菜品质 油菜种子 种皮颜色 种质资源 含油量 横切面 野生型 靶向 单株 黄籽 自交 积累 油菜 育种 发现 应用 表现 | ||
1.一种控制甘蓝型油菜种子种皮颜色的基因，其特征在于：所述基因为BnTT8基因，其核苷酸序列为BnA09.TT8见SEQ ID NO.1或BnC09.TT8b见SEQ ID NO.2。
2.根据权利要求1所述的一种控制甘蓝型油菜种子种皮颜色的基因，其特征在于：所述核苷酸序列SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2编码的氨基酸序列分别见SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4。
3.一种甘蓝型油菜黄籽突变体材料的获取方法，其特征在于：所述突变体材料由如权利要求1所述的BnTT8的两个拷贝同时发生基因编码区内的核苷酸序列突变获得。
4.根据权利要求3所述的一种甘蓝型油菜黄籽突变体材料的获取方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：获取如权利要求1所述的BnTT8基因片段；
步骤2：针对如权利要求1所述的BnTT8基因的核苷酸序列设计sgRNA，并构建载体；
步骤3：将步骤2中构建的载体转化至油菜株系中，获得突变体油菜株系；
步骤4：对突变体油菜株系进行检测并测序，确定株系基因型；
步骤5：获得的突变体油菜株系种植并自交分离，获得BnA09.TT8和BnC09.TT8基因被同时敲除的双纯合突变体。
5.根据权利要求4所述的一种甘蓝型油菜黄籽突变体材料的获取方法，其特征在于：步骤2中设计四个sgRNA，前三个sgRNA靶向MIR domain，第四个sgRNA的靶向序列在WD/ADdomain。
6.根据权利要求4所述的一种甘蓝型油菜黄籽突变体材料的获取方法，其特征在于：步骤2中运用pYLCRIPSR/Cas9多重基因组靶向载体系统构建载体。
7.根据权利要求4所述的一种甘蓝型油菜黄籽突变体材料的获取方法，其特征在于：步骤3中用农杆菌介导的下胚轴遗传转化方法将构建好的载体转入半冬性甘蓝型油菜纯系J9707中。
8.根据权利要求4所述的一种甘蓝型油菜黄籽突变体材料的获取方法，其特征在于：步骤5中获得的双纯合突变体的核苷酸序列见SEQ ID NO.29-SEQ ID NO.47。
9.如权利要求1或2所述的一种控制甘蓝型油菜种子种皮颜色的基因在甘蓝型油菜品质改良中的应用。
10.如权利要求3-8任一所述的一种甘蓝型油菜黄籽突变体材料的获取方法在油菜育种中的应用。
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