[发明专利]同时靶向HPV16 L1及HPV16 E5E6E7的宫颈癌疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一组免疫抗原肽编码核酸序列，其特征在于由三个核酸片段组成，这三个核酸片段分别编码E5：FLLCFCVLL，E6：KLPQLCTEL，和E7：YMLDLQPET。

2.权利要求1中所述的HPV16 E5、E6、E7三个肽片段的编码核酸序列在制备用于肿瘤及其在研究HPV16相关疾病的预防和治疗的制剂中的用途。

3.SEQ ID NO：1编码的HPV16 L1蛋白与权利要求1所述的E5、E6、E7抗原肽组合制备得到的宫颈癌疫苗制剂。

4.一种制备嵌合病毒样颗粒cVLPs的方法，其特征在于将权利要求1中所述的三个核酸片段以及SEQ ID NO：1所示的HPV16 L1利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统进行表达；分别通过构建、验证、扩增、纯化，最终获得HPV16 L1+“E5E6E7”嵌合病毒样颗粒cVLPs，其中包装扩增HPV16L1VLP做对照研究。

5.制备权利要求4所述的cVLPs的方法，其特征在于利用Bac to Bac杆状病毒表达系统，用PCR方法克隆HPV16 L1+“E5E6E7”基因，测序鉴定后与线性化的pFastHTb进行连接为pFastHTb一HPV16 L1+“E5E6E7”，使pFastHTb一HPV16 L1+“E5E6E7”与DH10BAC感受菌进行转座重组，利用抗性及蓝白斑筛选重组Bacmid一HPV16 L1+“E5E6E7”克隆，提取Bacmid一HPV16 L1+“E5E6E7”转染昆虫细胞Sf-9获得有感染力的病毒，利用病毒感染Sf-9细胞进行蛋白表达扩增，用RT-PCR和Western blot进行鉴定，筛选出表达HPV16型L1+“E5E6E7”的cVLPs。

6.如权利要求5所述的方法，其中HPV 16L1的上下游引物序列分别为：L1-P1：5'CGGAATTCAAATGTGCCTGTATACACGGGTC 3'；L1-P2：5'CGCGGATCCGCGCACACATATTACTTCCTGG3'。

7.根据权利要求4或5所述方法制备得到的嵌合病毒样颗粒cVLPs。

8.根据权利要求4或5所述的嵌合病毒样颗粒cVLPs制备方法制备得到的cVLPs在制备作为兼具预防和治疗双重作用的宫颈癌疫苗。

9.根据权利要求4或5所述的嵌合病毒样颗粒cVLPs制备方法制备得到的cVLPs在制备作为宫颈癌肿瘤发病机制及免疫治疗的试剂中的用途。