[发明专利]同时靶向HPV16 L1及HPV16 E5E6E7的宫颈癌疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了同时靶向HPV16 L1及HPV16 E5E6E7的宫颈癌疫苗及其制备方法，采用SEQ ID NO：1编码的HPV16 L1蛋白与E5、E6、E7抗原肽组合制备宫颈癌疫苗。本发明利用生物信息学分析针对人类主要HLA型别筛选评分较高的长肽肽片段，结合体外试验得到免疫效果最强的E5E6E7多肽片段组成双效疫苗核心，应用昆虫细胞‑杆状病毒表达系统制备L1‑E5E6E7宫颈癌疫苗,该宫颈癌疫苗具有预防、治疗双重效应。

一、技术领域

本发明属于肿瘤免疫治疗领域。

二、背景技术

子宫颈癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一,在全球妇女癌症发病率中居第2位， 严重威胁着广大妇女的健康和生命。WHO资料显示，全球每年宫颈癌的新发病例 为45万例，其中80％以上发生在发展中国家。我国是仅次于智利的宫颈癌第二高 发国家。虽然国际上已开发出九价，四价，二价宫颈癌预防性疫苗，但它们只能 对尚未存在HPV感染的人群起效，对于那些长期持续感染HPV的患者单纯的预防性 治疗无法解决其实际问题，特异的治疗性疫苗的研发迫在眉睫；另外，大多数宫 颈癌患者及术后复发患者多为HPV整合感染所致，预防性疫苗对整合后的HPV感染 无明显效应。对于术后复发的宫颈疾病患者多为HPV整合感染所致，以上市的针 对L1的预防性疫苗对整合后的HPV感染无能为力。因此,一个可以兼顾HPV持续 感染、HPV整合前后感染状态的治疗措施亟为临床所需也正成为新的研究焦点。

HPV感染是子宫颈癌首要致癌因素和重要启动因子已被公认。迄今为止已发 现不同型别HPV一百余种,而不同型别的划分是基于在L1,E6,E7的编码基因 序列中有10％的序列与现存型别的相关序列不符。根据致病特点分为高危型和低 危型,99％的子宫颈癌都与高危型的HPV有关,其中近60％的子宫颈癌因感染 HPV16导致。HPV早期区(E区)基因编码的蛋白有E1,E2,E4,E5,E6,E7,其 中E1,E2与病毒的复制和转化有关；E4可能参与病毒从被感染的细胞中释放和 部分的病毒包装；E5蛋白是一种最小的转化蛋白，在促进细胞的恶性转化中发挥 作用,并且与HPV感染早期抑制DNA损伤的细胞凋亡有关。在HPV感染早期,在 CIN阶段E5有大量表达,且在整合之前，E5的表达与宫颈上皮病变的程度正相关。 另外，我们前期的研究结果提示：HPV16，18E5(1)可以明显促进细胞的恶性 增殖，并改变细胞周期；(2)通过下调P21而抑制细胞调亡；(3)通过与细胞 有丝分裂纺锤体检测点蛋白的相互作用而导致细胞分裂异常，异型核出现，是肿 瘤发生之初的关键因素之一；(4)我们的动物实验证实有HPV16E5表达的肿瘤生 长及恶性程度明显高于对照组。高危型HPV E6,E7是一直以来的研究热点，它们 主要参与病毒恶性转化,并经由相关机制分别与p53、Rb相互作用,使细胞周期失 控而发生永生化。有研究指出，在HPV感染之初，E5有效的增强了E6，E7的恶性 转化作用，并且这种转化辅助是必须的。