[发明专利]一种真姬菇原生质体单核体的制备方法有效
| 申请号： | 201910916573.1 | 申请日： | 2019-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN110607241B | 公开（公告）日： | 2021-07-23 |
| 发明（设计）人： | 周陈力;鲍大鹏;陈洪雨;万佳宁;吴莹莹;杨瑞恒;李燕;王莹;茅文俊;汪滢;李金鑫 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院;上海丰科生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 刘桐亚 |
| 地址： | 201100 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 真姬菇 原生 质体 单核 制备 方法 | ||
1.一种真姬菇原生质体单核体的制备方法，其特征在于，其包括：将真姬菇木屑种接种至培养基中培养；
培养结束后，富集菌丝，进行酶解分离获得真姬菇原生质体，将获得的真姬菇原生质体涂布培养，挑选单菌落培养获得真姬菇原生质体单核体；
所述培养基为液体培养基。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述真姬菇木屑种的木屑种类选自杨木，枫木，桦木，松木或杉木。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述真姬菇木屑种的木屑种类选自杨木或枫木。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述真姬菇木屑种的接种量为1-5g/L。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述真姬菇木屑种的接种量为3g/L。
6.根据权利要求1-5任一项所述的制备方法，其特征在于，所述液体培养基为YMGP培养基、PDB培养基或YMG培养基。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述液体培养基为YMGP培养基。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述富集菌丝包括：将共培养后的真姬菇菌丝过滤收集菌丝，将收集的菌丝用第一高渗剂处理。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述第一高渗剂为蔗糖，甘露醇或硫酸镁。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述第一高渗剂为蔗糖。
11.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酶解分离包括：将富集得到的菌丝用酶解液酶解，过滤收集滤液，将滤液离心分离置于第二高渗剂中处理获得真姬菇原生质体。
12.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述第二高渗剂为蔗糖，甘露醇或硫酸镁。
13.根据权利要求12所述的制备方法，其特征在于，所述第二高渗剂为蔗糖。
14.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述涂布培养包括：将真姬菇原生质体涂布在平板培养基上进行暗培养；每个平板培养基上所述真姬菇原生质体的涂布数量为103-105个。
15.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，所述真姬菇原生质体的涂布数量为104-105个。
16.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，所述平板培养基为PDAS培养基，PDMS培养基或YMGS培养基；所述暗培养的温度为22-23℃。
17.根据权利要求16所述的制备方法，其特征在于，所述暗培养的温度为22℃。
18.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述挑选单菌落培养获得真姬菇原生质体单核体包括：从涂布培养后的培养基上挑取单菌落至新的培养基上，进行暗培养，显微观察淘汰有锁状联合的双核体菌丝，获得真姬菇原生质体单核体。
19.根据权利要求18所述的制备方法，其特征在于，暗培养的时间为7-8d，培养温度为22-23℃。
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