[发明专利]一种真姬菇原生质体单核体的制备方法

说明书

本发明公开了一种真姬菇原生质体单核体的制备方法，涉及真菌遗传与育种技术。其包括将真姬菇木屑种接种至培养基中培养，该方法可以解决无法获得原生质体再生菌落的问题，可以避免节孢子的萌发对后续原生质体的再生产生抑制效果。

技术领域

本发明涉及真菌遗传与育种技术，具体而言，涉及一种真姬菇原生质体单核体的制备方法。

背景技术

真姬菇(Hypsizigus marmorens)又名玉蕈、斑玉蕈等，是一种珍稀食用菌，其子实体提取物具有清除体内自由基、降血压、提高免疫力和延缓衰老等功效。2016年全国真姬菇(包含海鲜菇、蟹味菇和白玉菇)工厂化生产总量达到日产1000吨，占食用菌工厂化生产总量的10％，是我国工厂化栽培食用菌中的重要品类。在食用菌的遗传育种工作中，原生质体技术具有十分重要的意义。原生质体无细胞壁障碍，可对膜和细胞器进行基础研究，同时可进行遗传操作。此外，获得单核体是基因组测序工作的前提和基础。在获得单核体的方法中，原生质体单核化法所获得的单倍体菌株不经过重组，可以更完整地展示遗传信息，进行遗传分析。

目前，真姬菇原生质体制备过程中，存在无法获得原生质体再生菌落的问题。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种真姬菇原生质体单核体的制备方法。该方法可以解决无法获得原生质体再生菌落的问题。

本发明是这样实现的：

真姬菇原生质体单核体的制备方法，其包括将真姬菇木屑种接种至培养基中培养。

本发明使用真姬菇木屑种作为供种菌，将其接种至培养基中培养，可以避免真姬菇节孢子的干扰，在后续酶解后可以获得真姬菇的原生质体，经单菌落培养可以筛选获得无锁状联合的原生质体的单核体。而使用常规的真姬菇平板菌，受节孢子的干扰，节孢子的萌发时间短，原生质体的萌发时间长，节孢子抑制了原生质体的再生，从而无法获得原生质体的再生菌落。

真姬菇木屑种购自上海丰科生物科技股份有限公司。真姬菇木屑种又称为木屑栽培真姬菇，通过在木屑上栽培生产真姬菇，可以获得特殊的一种真姬菇种。

在本发明应用较佳的实施例中，上述真姬菇木屑种的木屑种类选自杨木，枫木，桦木，松木或杉木；

优选的，真姬菇木屑种的木屑种类选自杨木或枫木。

杨木和枫木木屑更适合于真姬菇菌丝的生长和栽培，且品质较好。

在本发明应用较佳的实施例中，上述培养基为液体培养基，液体培养基为YMGP培养基、PDB培养基或YMG培养基；

优选的，液体培养基为YMGP培养基。

在YMGP培养基培养条件下有利于更多原生质体的再生，可以获得更多的真姬菇原生质体单核体。

在本发明应用较佳的实施例中，上述真姬菇木屑种的接种量为1-5g/L；

优选的，真姬菇木屑种的接种量为3g/L。

在本发明提供的接种量范围内获得的真姬菇原生质体单核体数量最多，品质更好。

上述制备方法还包括：共培养结束后，富集菌丝，进行酶解分离获得真姬菇原生质体，将获得的真姬菇原生质体涂布培养，挑选单菌落培养获得真姬菇原生质体单核体。

在本发明应用较佳的实施例中，上述富集菌丝包括将共培养后的真姬菇菌丝过滤收集菌丝，将收集的菌丝用第一高渗剂处理；

优选的，第一高渗剂为蔗糖，甘露醇或硫酸镁；

更优选的，第一高渗剂为蔗糖。