[发明专利]糖基转移酶突变体及其应用

权利要求书

1.糖基转移酶UGT76G1突变体，其特征在于，所述突变体相对于野生型的糖基转移酶UGT76G1，其空间结构中与糖基供体、糖基受体相互作用的氨基酸发生突变，其催化活性改变；所述突变体是氨基酸序列根据SEQ ID NO: 1发生突变的蛋白，其第284位突变为Ser，其催化含有1,2-双葡萄糖基的底物进行1,3-糖基化的活性提高，催化在葡萄糖单糖基底物基础上进行1,3-糖基化的活性降低；或

所述突变体是氨基酸序列根据SEQ ID NO: 1发生突变的蛋白，其第88位突变为Val。

2.如权利要求1所述的糖基转移酶UGT76G1突变体，其特征在于，所述第284位突变为Ser的突变体，其对底物甜菊醇双糖苷，甜菊苷或莱宝迪苷D的催化活性提高，而对底物甜菊醇单糖苷，甜叶悬钩子苷，莱宝迪苷A的催化活性降低。

3.如权利要求2所述的糖基转移酶UGT76G1突变体，其特征在于，所述第284位突变为Ser的突变体，其催化莱宝迪苷D生成莱宝迪苷M的活性提高且催化莱宝迪苷A生成副产物莱宝迪苷I的活性减弱。

4.如权利要求1所述的糖基转移酶UGT76G1突变体，其特征在于，所述第88位突变为Val的突变体，其对底物甜菊双糖苷、甜菊苷、莱宝迪苷A或莱宝迪苷D催化活性增强。

5.分离的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸是编码权利要求1～4任一所述的糖基转移酶UGT76G1突变体。

6.一种载体，其特征在于，它含有权利要求5所述的多核苷酸。

7.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求6所述的载体，或基因组中整合有权利要求5所述的多核苷酸；所述宿主细胞不是植物细胞。

8.如权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，所述细胞中包括：基于1,2-双葡萄糖基或葡萄糖单糖基底物进行1,3-糖基化的反应系统，其中用于糖基化的酶为糖基转移酶UGT76G1突变体；所述反应系统为莱宝迪苷M生成系统。

9. 如权利要求8所述的宿主细胞，其特征在于，所述莱宝迪苷M生成系统包括：

以莱宝迪苷A为底物的系统，包括：SEQ ID NO: 1第284位突变为Ser的糖基转移酶UGT76G1突变体，以及将莱宝迪苷A转化为莱宝迪苷D的酶；或

以甜菊苷为底物的系统，包括：将甜菊苷转化为莱宝迪苷A的酶、其根据SEQ ID NO: 1第284位突变为Ser的糖基转移酶UGT76G1突变体，以及将莱宝迪苷A转化为莱宝迪苷D的酶；或

以莱宝迪苷D为底物的系统，包括：SEQ ID NO: 1第284位突变为Ser的糖基转移酶UGT76G1突变体；或

以苷元甜菊醇为底物的系统，包括：SEQ ID NO: 1第284位突变为Ser的糖基转移酶UGT76G1突变体，将莱宝迪苷A或甜菊苷转化为莱宝迪苷D的酶以及将苷元甜菊醇催化为甜菊苷或莱宝迪苷A的酶。

10. 如权利要求8所述的宿主细胞，其特征在于，所述莱宝迪苷M生成系统包括：

以甜菊苷为底物的系统，包括：将甜菊苷转化为莱宝迪苷A的酶、对应于SEQ ID NO: 1第88位突变为Val的糖基转移酶UGT76G1突变体，以及将莱宝迪苷A转化为莱宝迪苷D的酶；或

以莱宝迪苷D为底物的系统，包括：对应于SEQ ID NO: 1第88位突变为Val的糖基转移酶UGT76G1突变体；或

以苷元甜菊醇为底物的系统，包括：对应于SEQ ID NO: 1第88位突变为Val的糖基转移酶UGT76G1突变体，将莱宝迪苷A或甜菊苷转化为莱宝迪苷D的酶以及将苷元甜菊醇催化为甜菊苷或莱宝迪苷A的酶。