[发明专利]一种石油烃降解菌的培养基及高密度发酵方法

权利要求书

1.一种石油烃降解菌的培养基，其特征在于，所述石油烃降解菌的培养基包括以下成分：葡萄糖、胰蛋白胨、大豆蛋白胨、磷酸氢二钾、硫酸铵、氯化镁和氯化钙。

2.根据权利要求1所述的石油烃降解菌的培养基，其特征在于：所述石油烃降解菌的培养基为发酵培养基或补料培养基。

3.根据权利要求2所述的石油烃降解菌的培养基，其特征在于：当所述石油烃降解菌的培养基为发酵培养基时，所述发酵培养基组分按g/L计：葡萄糖为5-8、胰蛋白胨为17-20、大豆蛋白胨为3-5、氯化钠3-5，磷酸氢二钾为2-4、氯化镁为0.0067-0.0075、氯化钙为0.0114-0.017、硫酸铵为0.013-0.02，余量为水，高压蒸汽灭菌。

4.根据权利要求2所述的石油烃降解菌的培养基，其特征在于：当所述石油烃降解菌的培养基为补料培养基时，所述补料培养基组分按g/L计：葡萄糖50-60，胰蛋白胨60-80，大豆蛋白胨15-20，磷酸氢二钾10-15，氯化镁0.067-0.075，氯化钙0.114-0.17，硫酸铵0.13-0.2，余量为水。

5.一种石油烃降解菌的高密度发酵方法，其特征在于，所述石油烃降解菌的高密度发酵方法采用权利要求2-4任一项所述的石油烃降解菌的培养基作为发酵培养基或补料培养基，所述石油烃降解菌的高密度发酵方法包括以下步骤：

步骤一：将石油烃降解菌W33经种子培养，得到种子液；

步骤二：将种子液以8％-10％的比例接种到发酵培养基中，进行发酵，所述发酵培养基采用权利要求3所述的发酵培养基。

6.根据权利要求5所述的石油烃降解菌的高密度发酵方法，其特征在于：所述种子培养所采用的种子培养基组分按g/L计为：葡萄糖5-8，胰蛋白胨17-20，大豆蛋白胨3-5，氯化钠3-5，磷酸氢二钾2-4，余量为水，121℃高压蒸汽灭菌20min。

7.根据权利要求6所述的石油烃降解菌的高密度发酵方法，其特征在于：所述石油烃降解菌的高密度发酵方法为摇瓶发酵培养，所述摇瓶发酵培养包括以下步骤：

步骤一：种子培养，得到种子液：将石油烃降解菌W33接种至种子培养基中，在35℃、200rpm的条件下培养24h-36h，使其OD₆₀₀为2.5-3.5；

步骤二：将种子液按照10％的接种量接入发酵摇瓶中，在35℃、200rpm摇床中培养75h-96h。

8.根据权利要求6所述的石油烃降解菌的高密度发酵方法，其特征在于：所述石油烃降解菌的高密度发酵方法为发酵罐发酵培养，所述发酵罐发酵培养包括以下步骤：

步骤一：将石油烃降解菌W33进行斜面培养：将石油烃降解菌W33与斜面培养基在35℃下培养72h，斜面培养基为种子培养基添加2％琼脂；

步骤二：种子培养，得到种子液：种子液接入种子培养基中，于35℃、200rpm条件下培养24h-36h，得种子液；

步骤三：将种子液以8％-10％的接种比例接种到发酵培养基中，于30℃-35℃、200rpm-220rpm条件下发酵，在发酵28h-30h时以1mL/min-1.5mL/min的速率补加1L-1.5L的补料培养基，并控制葡萄糖浓度在1.8g/L-2g/L以下，共发酵70h-96h。