[发明专利]一种石油烃降解菌的培养基及高密度发酵方法

说明书

本发明属于微生物发酵领域，尤其涉及一种石油烃降解菌的培养基及高密度发酵方法，具体制备方法包括以下步骤：使用Gordonia alkanivorans W33(菌种保藏号，CGMCC No.6845)菌，在补料‑分批发酵中活菌数达到了7.48×10⁹个/mL。本发明同时还公开了上述高密度发酵的方法。通过优化胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB培养基)中碳源、氮源的用量、添加适量的金属盐：氯化镁和氯化钙以及发酵时间、溶氧以及转速，确定了合适的发酵方法，使最终菌浓度提高了175％，大幅度地降低了生产成本。

技术领域

本发明属于微生物发酵领域，尤其涉及一种石油烃降解菌的培养基及高密度发酵方法。

本发明中所称石油烃降解菌W33(Gordonia alkanivorans)分类命名： Gordoniaalkanivorans(食烷烃戈登氏菌)，已于2012年11月21日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏编号为CGMCC No.6845，并已存活。

背景技术

现有技术和缺陷：

含油固废污染的微生物修复技术的关键是从环境中筛选出性能优良的石油烃降解菌，并将其高效应用于石油污染环境治理。因石油烃降解菌多筛选自石油污染环境，其在大规模培养时存在培养效率低下，活菌单位数低等问题，导致微生物修复含油固废时成本偏高，进一步限制了其工业化应用。

解决上述技术问题的难度和意义：

因此，基于这些问题，提供一种所添加的物质成分单一，针对性强，可以使石油烃降解菌W33发酵时间缩短到70h，其最终发酵液达到7.48×10⁹个的石油烃降解菌的培养基及高密度发酵方法具有重要的现实意义。

发明内容

本发明目的在于为解决公知技术中存在的技术问题而提供一种所添加的物质成分单一，针对性强，可以使石油烃降解菌W33发酵时间缩短到70h，其最终发酵液达到7.48×10⁹个的石油烃降解菌的培养基及高密度发酵方法。

本发明为解决公知技术中存在的技术问题所采取的技术方案是：

一种石油烃降解菌的培养基，所述石油烃降解菌的培养基包括以下成分：葡萄糖、胰蛋白胨、大豆蛋白胨、磷酸氢二钾、硫酸铵、氯化镁和氯化钙。

本发明还可以采用以下技术方案：

在上述的石油烃降解菌的培养基中，进一步的，所述石油烃降解菌的培养基为发酵培养基或补料培养基。

种子液培养基与发酵液培养基由以下方法得到：对胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB培养基)中的成分：葡萄糖、胰蛋白胨、大豆蛋白胨、磷酸氢二钾以及非TSB培养基组分：硫酸铵、氯化镁和氯化钙，进行单因素优化试验，得到葡萄糖、胰蛋白胨、大豆蛋白胨、磷酸氢二钾、硫酸铵、氯化镁和氯化钙的最适用量。

在上述的石油烃降解菌的培养基中，进一步的，当所述石油烃降解菌的培养基为发酵培养基时，所述发酵培养基组分按g/L计：葡萄糖为5-8、胰蛋白胨为17-20、大豆蛋白胨为3-5、氯化钠3-5，磷酸氢二钾为2-4、氯化镁为 0.0067-0.0075、氯化钙为0.0114-0.017、硫酸铵为0.013-0.02，余量为水，高压蒸汽灭菌。

在上述的石油烃降解菌的培养基中，进一步的，当所述石油烃降解菌的培养基为补料培养基时，所述补料培养基组分按g/L计：葡萄糖50-60，胰蛋白胨60-80，大豆蛋白胨15-20，磷酸氢二钾10-15，氯化镁0.067-0.075，氯化钙0.114-0.17，硫酸铵0.13-0.2，余量为水。