[发明专利]基于核酸水凝胶快速检测食品中T-2毒素的方法

权利要求书

1.一种基于核酸水凝胶快速检测食品中T-2毒素的方法，其特征在于，包括如下步骤：

构建以T-2毒素适体为linker交联剂的核酸水凝胶，所述的核酸水凝胶中均匀包埋着辣根过氧化物酶；

向所述的核酸水凝胶中加入待测样，所述的待测样中T-2毒素浓度为0.01ng mL^-1-10000ng mL^-1，所述的T-2毒素适体与T-2毒素结合，凝胶破裂，释放出辣根过氧化物酶；

在一定时间内，辣根过氧化物酶催化过氧化氢和碘化钾反应生成碘单质刻蚀金纳米棒，根据金纳米棒在紫外分光光度计下呈现的吸收峰计算T-2毒素的含量。

2.根据权利要求1所述的基于核酸水凝胶快速检测食品中T-2毒素的方法，其特征在于，所述的构建以T-2毒素适体为交联剂的核酸水凝胶包括如下步骤：

修饰有丙烯酰胺的互补链A100μM和互补链B100μM分别加入终浓度为4wt％丙烯酰胺，随后在35-40℃抽排空气10-15min，除去氧气；

加入终浓度为1.4％新鲜配制的过硫酸铵和终浓度为2.8％新鲜配制的四甲基乙二胺；在35-40℃抽排空气，反应10-15min，可得到髙分子互补链A和互补链B；

将髙分子互补链A和互补链B混匀后在60-65℃下孵育5-10min，重复加热两次确保试剂完全混匀；随后加入不同浓度的交联剂(30、35、40、45μM)及辣根过氧化物酶，在60-65℃下孵育5-10min，重复加热3次确保试剂混匀，再冷却至室温形成核酸水凝胶；

用磷酸缓冲溶液洗涤胶平面，除去胶表面多余的辣根过氧化物酶。

3.根据权利要求1所述的基于核酸水凝胶快速检测食品中T-2毒素的方法，其特征在于，所述的金纳米棒由如下方法制备而得：

制备金种子：在0.5-1.0mL 0.5mM四氯金酸溶液中加入0.5-1.0mL 0.2M十六烷基三甲基溴化铵溶液；振荡混匀后，立即加入0.1-0.2mL 6mM新鲜配制的硼氢化钠溶液；剧烈振荡2-5min，种子溶液由黄色变成茶色，室温静置30-45min后即可得到金种子，常温保存，备用；

制备生长液：称取0.9-1.1g十六烷基三甲基溴化铵及0.11-0.13g 5-溴水杨酸于250mL圆底烧瓶中，用25-30mL温水(50-70℃)溶解；随后加入1.2-1.5mL 4.0mM硝酸银溶液；得到的溶液放入30-37℃的水浴锅中下静置15-20min后，加入25mL 1.0mM四氯金酸溶液，搅拌15-20min；最后加入0.2mL 0.064-0.072M抗坏血酸，混匀30-60s直至溶液变成无色，即可得到生长液；

金纳米棒的生长：在上述得到的生长液中加入80-85μL制得的种子液，混匀后置于30-37℃水浴锅中，静置12-14h，得到所需的金纳米棒；最后，得到的金纳米棒用0.05M十六烷基三甲基溴化铵离心重悬3遍除去生长液。

4.根据权利要求2所述的基于核酸水凝胶快速检测食品中T-2毒素的方法，其特征在于，所述的髙分子互补链A、髙分子互补链B、交联剂三者的物质的量之比为110：100：45时，核酸水凝胶响应时间为15min。

5.根据权利要求1所述的基于核酸水凝胶快速检测食品中T-2毒素的方法，其特征在于，所述的碘化钾的浓度为0.10M。

6.根据权利要求1所述的基于核酸水凝胶快速检测食品中T-2毒素的方法，其特征在于，所述的过氧化氢的浓度为0.075M。

7.根据权利要求1所述的基于核酸水凝胶快速检测食品中T-2毒素的方法，其特征在于，根据金纳米棒在紫外分光光度计下呈现的吸收峰计算T-2毒素的含量包括步骤：建立标准曲线：在上述水凝胶中加入10μL不同浓度的T-2毒素标准样品，室温下静置15min后，移出上清液于2mL 0.05mg/mL金纳米棒，5mL 0.10M碘化钾，20mL 0.075M过氧化氢中，室温下静置3min后，进行紫外光谱扫描。