[发明专利]犬科动物骨髓间充质干细胞的培养方法在审
| 申请号： | 201910919472.X | 申请日： | 2019-09-26 |
| 公开（公告）号： | CN110592008A | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 曹力;马海蓉;沙力塔娜提·乌尔曼别克;穆文博;李亦丞;谢祯子 | 申请（专利权）人： | 新疆医科大学第一附属医院 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 65105 乌鲁木齐合纵专利商标事务所 | 代理人： | 周星莹;汤建武 |
| 地址： | 830011 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 骨髓间充质干细胞 骨髓 间充质干细胞 充质干细胞 分泌 传代 骨髓血细胞 培养基选择 细胞外基质 造血干细胞 动物骨髓 过程获得 基质细胞 流式细胞 免疫分选 外界干扰 营养环境 脂肪细胞 骨髓血 前处理 微环境 原有的 产率 贴壁 种犬 去除 过滤 采集 生长 | ||
1.一种犬科动物骨髓间充质干细胞的培养方法，其特征在于按下述步骤进行：第一步，培养：将离体的犬科动物骨髓加入含有α-MEM完全培养基的培养皿中混合均匀，每10mlα-MEM完全培养基加入2.0ml至3.0ml的犬科动物骨髓，然后在含有5％CO2的气体环境中培养3天至5天后，得到以骨髓间充质干细胞为主的贴壁细胞群；第二步，消化、离心：将以骨髓间充质干细胞为主的贴壁细胞群依序进行磷酸缓冲盐溶液清洗、胰酶消化、α-MEM完全培养基中和以及室温离心后得到骨髓间充质干细胞。
2.根据权利要求1所述的犬科动物骨髓间充质干细胞的培养方法，其特征在于第二步得到的骨髓间充质干细胞在α-MEM完全培养基中进行传代培养，每4天至6天按照1:3比例传代一次。
3.根据权利要求1或2所述的犬科动物骨髓间充质干细胞的培养方法，其特征在于α-MEM完全培养基是由15％胎牛血清、1％双抗以及余量的α-MEM培养基配制而成。
4.根据权利要求1或2所述的犬科动物骨髓间充质干细胞的培养方法，其特征在于第二步中，磷酸缓冲盐溶液、0.25％的胰酶、α-MEM完全培养基的三者使用量均按照2.0ml至3.0ml犬科动物骨髓血，采用10ml磷酸缓冲盐溶液洗2次，2ml 0.25％的胰酶消化、消化温度为37℃、消化时间为1.5至2min，6mlα-MEM完全培养基中和。
5.根据权利要求3所述的犬科动物骨髓间充质干细胞的培养方法，其特征在于第二步中，磷酸缓冲盐溶液、0.25％的胰酶、α-MEM完全培养基的三者使用量均按照2.0ml至3.0ml犬科动物骨髓血，采用10ml磷酸缓冲盐溶液洗2次，2ml 0.25％的胰酶消化、消化温度为37℃、消化时间为1.5至2min，6mlα-MEM完全培养基中和。
6.根据权利要求1或2或5所述的犬科动物骨髓间充质干细胞的培养方法，其特征在于第二步中，每1000g第一步得到的培养物离心10min。
7.根据权利要求3所述的犬科动物骨髓间充质干细胞的培养方法，其特征在于第二步中，每1000g第一步得到的培养物离心10min。
8.根据权利要求4所述的犬科动物骨髓间充质干细胞的培养方法，其特征在于第二步中，每1000g第一步得到的培养物离心10min。
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