[发明专利]鉴定鸡细小病毒和鸡传染性贫血病毒的引物组及其应用

说明书

本发明公开了鉴定鸡细小病毒和鸡传染性贫血病毒的引物组，包括引物对Ⅰ和引物对Ⅱ，引物对Ⅰ由引物ChPV‑F和ChPV‑R组成，引物对Ⅱ由引物CIAV‑F和CIAV‑R组成；引物ChPV‑F、ChPV‑R、CIAV‑F和CIAV‑R分别具有序列表SEQ.ID.NO.1至SEQ.ID.NO.4的碱基序列。据此，发明人还建立了相应检测鉴定方法并研制了对应试剂盒。本发明建立的二重PCR可用于快速检测鸡细小病毒和鸡传染性贫血病毒的混合感染，适于大批量检测，既可节约成本和节省时间，又能减少污染，具有很高的实用价值。

技术领域

本发明属于鸡细小病毒和鸡传染性贫血病毒检测技术领域，尤其涉及鉴定鸡细小病毒和鸡传染性贫血病毒的引物组及其应用。

背景技术

鸡细小病毒(Chincken parvovirus，ChPV)是一种单链DNA病毒，为引起鸡肠道疾病的主要病原体之一，可以引起以腹泻、精神抑郁、体温调节障碍、生长迟缓、增加饲料消耗等为特征的急性或慢性肠道性疾病、矮小综合症、营养不良综合症。ChPV在鸡群中普遍存在，主要侵害雏鸡，但以商品肉鸡感染率较高、蛋鸡或种鸡次之，给养鸡业造成巨大的经济损失。

鸡传染性贫血病由鸡传染性贫血病病毒(Chicken infectious anemia virus，CIAV)引起的一种传染病，可引起雏鸡全身淋巴组织萎缩，尤其是骨髓造血组织和胸腺等淋巴组织，进而导致雏鸡发生免疫抑制。日本学者Yuasa等1979年首次发现并报道了该病，崔现兰等1992年在我国发病鸡群中首次分离到该病毒，从而确证了该病在我国的存在，目前CIAV已在各种不同鸡群中广泛传播，甚至在某些SPF鸡群中也检测到CIAV的存在。除垂直传播和水平传播外，CIAV还可以通过污染禽弱毒疫苗来感染鸡群。因此，加强对禽弱毒疫苗中CIAV污染的监测对于种禽场防控CIAV也极其重要。

目前，实验室诊断检测上述两种病原的方法以传统的病毒分离、琼脂扩散试验、间接荧光试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)等为主，但这些检测方法存在耗时长、敏感性低、标准化难等缺点，在实际应用中具有一定的局限性，因此，越来越多的学者致力于PCR检测方法。

在临床检测中，常出现多种病原体混合感染，为了用于多种病原的鉴别诊断，迫切需要一种高通量、低成本、高效率的检测方法进行批量快速检测。二重(或多重)PCR采用多对引物同时扩增多个模板，克服了常规PCR的不足。但是，二重(或多重)PCR是在同一体系中存在多种模板和引物，复合扩增中引物之间、模板之间、引物与模板之间可能存在竞争抑制。因此有必要对各种条件进行优化，需要防止引物与模板间的非特异性结合，避免出现非特性条带，同时要尽量避免产生引物二聚体。此外，目的片段要有合适的梯度，各引物退火条件尽可能一致，以确保两种(或多种)扩增产物量的相对平衡。

与常规PCR相比，多重PCR具有可同时检测、鉴别多种病原体的特点，在多种病原混合感染的鉴别诊断中具有独特的优势和很高的临床实用价值，但目前尚无可快速鉴别诊断ChPV与CIAV的多重PCR检测方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供快速、高效、准确的鉴定鸡细小病毒和鸡传染性贫血病毒的引物组，适于大批量检测，既可节约成本和节省时间，又能减少污染，具有很高的实用价值。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

鉴定鸡细小病毒和鸡传染性贫血病毒的引物组，包括引物对Ⅰ和引物对Ⅱ，引物对Ⅰ由引物ChPV-F和ChPV-R组成，引物对Ⅱ由引物CIAV-F和CIAV-R组成；引物ChPV-F、ChPV-R、CIAV-F和CIAV-R分别具有序列表SEQ.ID.NO.1至SEQ.ID.NO.4的碱基序列。

引物ChPV-F、ChPV-R、CIAV-F和CIAV-R的摩尔比为3:3:2:2。

上述引物组在PCR扩增中的应用，退火温度为56.1℃。